Características fenotípicas e genéticas relacionadas à Brazilian Klebsiella carbapenemase - BKC-1

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Martins, Willames Marcos Brasileiro da Silva [UNIFESP]
• Orientador(a): Gales, Ana Cristina [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001t530
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Infecção; Resistência bacteriana; Carbapenemase; Elementos genéticos móveis
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7120458; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/53147

Klebsiella pneumoniae é um patógeno largamente reportado causando diferentes tipos de infecções, que vem se destacando pelo aumento nos níveis de resistência. Dentre os mecanismos de resistência, a produção de carbapenemases apresenta grande destaque, pelo impacto clínico que as infecções causadas por K. pneumoniae produtoras de carbapenemases podem acarretar no desfecho de pacientes infectados. O objetivo deste estudo foi determinar as características microbiológicas e genéticas de isolados bacterianos produtores da carbapenemase BKC-1. A presente tese foi subdividida em cinco artigos realizados durante o doutorado. Artigo científico 1: Recentemente descrita, a carbapenemase BKC-1 foi reportada em isolados clínicos de K. pneumoniae no Estado de São Paulo. Este estudo teve como objetivo, investigar a frequência desta enzima em isolados clínicos de Klebsiella spp. provenientes de diferentes estados brasileiros. Seiscentos e trinta e sete isolados clínicos provenientes das cinco regiões brasileiras foram investigados. Dentre estes isolados, apenas em dois deles foi identificada a produção de BKC-1. Estes isolados também foram detectados em distintos hospitais do Estado de São Paulo e pertenciam aos ST442 e ST1781 que compõem o CC442. Os isolados apresentaram fenótipo de multirresistente, com a presença concomitante de diferentes mecanismos de resistência. Um dos isolados apresentou resistência às polimixinas devido a inserção de uma IS no gene mgrB, que levou à inativação do mesmo. Também foi possível detectar que ambos os isolados apresentavam o mesmo plasmídeo carreando o gene blaBKC-1, o qual era idêntico ao originalmente descrito em 2015. Artigo científico 2: Pelo fato da BKC-1 apresentar fraco poder hidrolítico frente aos carbapenens, este estudo avaliou comparativamente a performance dos testes fenotípicos utilizados para a detecção de carbapenemase para a triagem de amostras produtoras de BKC-1. Testes tradicionais, como o THM, DDST-AFB não foram capazes de detectar a presença de BKC-1 entre os isolados testados. Por outro lado, os testes colorimétricos Carba-NP, Blue-carba e Carbapenembac foram capazes de identificar a produção da carbapenemase BKC-1 nos isolados testados. Testes laboratoriais mais laboriosos como detecção da hidrólise por MALDI-TOF MS e espectofotometria também foram eficientes na detecção da atividade da BKC-1. Artigo científico 3: Baseado no manuscrito publicado por Partridge (2016), o artigo 3 é uma carta resposta aos achados genéticos propostos pela autora sobre a associação do gene blaBKC-1 com aph3a-VI e a ISKpn23. Artigo científico 4: Devido ao desconhecimento dos mecanismos genéticos envolvidos com a aquisição e a mobilização de blaBKC-1, experimentos de mobilização (conjugação e transposição), e expressão foram realizados com o objetivo de determinar o papel da ISKpn23 na mobilização e na expressão do gene blaBKC-1. Os experimentos demonstraram que a ISKpn23 foi capaz de modular a expressão do gene blaBKC-1, contribuindo para o aumento das CIMs aos β-lactâmicos. Por outro lado, a ISKpn23 não modula expressão do gene aph3a-VI. Adicionalmente, experimentos de transposição evidenciaram a capacidade de co-mobilização do pA60136 por conjugação, mas não foram capazes de elucidar como se dá a movimentação genética do gene blaBKC-1. Artigo científico 5: Apesar dos raros relados de isolados produtores de BKC-1 no Brasil, o objetivo deste estudo foi relatar a disseminação silenciosa de um clone epidêmico de K. pneumoniae ST442 produtor de BKC-1 bem como a aquisição de blaBKC-1 por um clone de K. pneumoniae hipervirulento, ST11. Estes isolados foram caracterizados microbiologicamente. A disseminação ocorreu em um hospital universitário localizado na cidade de São Paulo durante aproximadamente três anos (2010-2012). Neste período, 16 isolados produtores de BKC-1 foram recuperados com a presença de um clone majoritário (A1/ST442; em 15 isolados) pertencente ao ST442. Em seis dos dezesseis isolados foi identificada a coprodução de BKC-1 e KPC-2.