Relação de alterações conformacionais da prolil oligopeptidase devido a interação com a α – sinucleína

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Santos, Gabriel Silva [UNIFESP]
• Orientador(a): Oliveira, Vitor Marcelo Silveira Bueno Brandao De [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002v4g9
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Prolyl Oligopeptidase; Alfa Sinucleína; Mudanças Conformacionais; Fluorescência; Dicroísmo Circular; Timet Oligopeptidase; tRNA; Aminoácido não natural; Pireno
• Palavras-chave em Inglês: Prolyl Oligopeptidase; Alpha Synuclein; Conformational Changes; Fluorescence; Circular Dichroism
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7778689; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59596

A Prolyl oligopeptidase (EC 3.4.21.26, POP) é uma serino-peptidase, envolvida no metabolismo de neuropeptídios e hormônios peptídicos. Estudos in vitro e in vivo mostram que a POP interage com a alfa sinucleína (syn) acelerando a agregação desta proteína, embora quando a prolyl oligopeptidase é inibida a agregação da asyn é reduzida. Esse mecanismo de participação da POP na agregação da asyn é totalmente desconhecido. A estrutura da POP não permite que peptídeos maiores que 30 resíduos de aminoácido ou proteínas atingem seu centro ativo. Dados da literatura mostram que a POP apresenta uma conformação aberta (afastamento dos domínios, catalítico e regulatório, com exposição do centro ativo) e uma fechada (aproximação dos domínios, catalítico e regulatório). O objetivo geral desse projeto foi estudar esse possível movimento de “abre e fecha” que pode ocorrer na POP devido à interação com substratos ou inibidores, e a implicação dessa alteração conformacional na interação com a alfa sinucleína. Para tal finalidade foram utilizadas sondas espectroscópicas, quando próximas possuem emissão de fluorescência características, excimero, com o intuito de avaliar os movimentos conformacionais da POP e a possível implicação desses movimentos na interação com a syn. Para validar a metodologia aplicada utilizamos a Thimet Oligopeptidase (TOP) uma proteína bastante estudada em nosso grupo de pesquisa. A utilização da TOP forneceu dados importantes para a utilização das sondas espectroscópicas mostrando que a separação de espécies oligoméricas é fundamental para as análises aqui estudadas. As proteínas com as sondas espectroscópicas apresentaram atividade, indicando que a estrutura terciária não foi prejudicada e consequentemente a sua função. Foram avaliados a aproximação das sondas com o aumento da concentração de cloreto de guanidina mostrando um afastamento da sonda e o desaparecimento do excímero. Além disso, avaliamos por dicroísmo circular a interação POP - syn e o perfil de hidrolise da POP na presença de syn. Interessantemente, a alta concentração de syn dificulta o acesso do substrato ao centro ativo, e a interação entre as proteínas ocorre uma mudança na estrutura secundária.