Estudo da interação da Prolil endopeptidase-like com a Alfa Sinucleína

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Louredo, Gabriel Silva Santos Narciso [UNIFESP]
• Orientador(a): Oliveira, Vitor Marcelo Silveira Bueno Brandão de [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002p16t
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Cinética de agregação; Parkinson; Tioflavina; Prolil endopeptidase-like; Prolil oligopeptidase; Alfa sinucleína
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11600/74093

A alfa-sinucleína (αSyn) é uma proteína intrinsicamente desordenada associada a doenças neurodegenerativas, como a doença de Parkinson. Sua agregação pode ser modulada por outras proteínas, e estudos demonstraram que a prolil endopeptidase (POP) acelera esse processo. Nesse estudo decidimos investigar a prolil endopeptidase-like (PREPL) devido a sua similaridade estrutural com a POP, para verificar se essa proteína também poderia interagir com a αSyn. A PREPL humana foi clonada, expressa em Escherichia coli, purificada e caracterizada por métodos bioquímicos e biofísicos. Sua atividade foi testada com substratos fluorogênicos, para verificar sua capacidade de catalisar a hidrólise de ligações peptídicas e éster,, enquanto a interação com a αSyn foi analisada por dicroísmo circular (CD), fluorescência intrínseca de resíduos aromáticos (principalmente triptofano), ressonância plasmônica de superfície (SPR) e ensaios de agregação usando a tioflavina T (ThT) como sonda fluorescente. Os resultados reforçam dados publicados que a PREPL não apresenta atividade sobre substratos peptídicos, mas hidrolisa substratos éster. Ensaios de fluorescência de triptofano indicaram mudanças estruturais da PREPL na presença da αSyn, assim como os dados de dicroísmo circular indicaram uma mudança de espectro, quando PREPL e αSyn são misturadas,reforçando a hipótese de interação entre essas proteínas. A análise por SPR determinou uma constante de dissociação (Kd) de aproximadamente 1,4 μM para a interação PREPL-αSyn, semelhante à observada para POP-αSyn. Ensaios de agregação mostraram que a PREPL altera a cinética de agregação da αSyn de maneira concentração-dependente. Esses achados sugerem que a PREPL pode desempenhar um papel na regulação da αSyn, influenciando sua propensão à agregação e formação de fibrilas amiloides. Além disso, foi obtido dados de experimentos de RMN para investigar os resíduos da αSyn, que interagem com a POP, revelando alterações significativas de resíduos na estrutura da αSyn,. A similaridade na afinidade entre PREPL e αSyn em relação à POP levanta questões sobre possíveis mecanismos comuns. Estudos futuros são necessários para esclarecer o impacto dessa interação e suas implicações nas sinucleinopatias.