Estudo da participação das calicreínas teciduais na fisiopatogenia da esclerose múltipla

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Sales, Clisleyd Glaucielly Santos [UNIFESP]
• Orientador(a): Juliano, Maria Aparecida [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/00130000243fh
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Calicreína tecidual humana; KLK6; Esclerose múltipla; Enzimas proteolíticas; Neurotrofinas; Homeostase
• Palavras-chave em Inglês: Kallikrein human tissue; KLK6; Multiple sclerosis; Proteolytic enzymes; Neurotrophins; Homeostasis
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11600/64278; https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=9132513

Objetivo: No intuito de verificar se fatores neurotróficos são capazes de regular a ação da calicreína tecidual 6 humana realizou-se esse projeto. Métodos: Foram desenhadas e sintetizadas67 peptídeos FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) obtidos a partir das sequências das neurotrofinas NGF, BDNF, NTF-3 e NTF- 4 tendo o resíduo de arginina (R) na posição central, devido a preferência de hidrólise da enzima. Estes peptídeos foram ensaiados como substratos da KLK6 e as sequências resistentes à hidrólise testadas como inibidores para a mesma enzima, sendo para o último, utilizado o peptídeo Bz-A-F-R-ACC, sintetizado pela técnica FMOC, como substrato da enzima. Os fragmentos gerados a partir da hidrólise das proteínas pela KLK6 foram isolados por cromatografia líquida associada ao espectrômetro de massas. Os fragmentos de neurotrofina passíveis de inibir a KLK6, assim como os que sofreram hidrólise pela mesma enzima, passaram por uma etapa de modelagem molecular, para avaliarmos sua localização na proteína e a identificarmos possibilidade de interação com a enzima, de acordo com sua localização. Resultados: As sequências consideradas como passíveis de hidrólise foram selecionadas de acordo com a relação Kcat/Km apresentadas nos ensaios cinéticos, enquanto as passíveis de inibição foram determinadas pelos respectivos valores de IC50 e de sua constante de inibição. Conclusão: Os ensaios realizados entre a KLK6 e os peptídeos FRET obtidos a partir das sequências das proteínas de neurotrofinas sugerem a possibilidade da mesma proteína ser passível de hidrólise e de inibição, visto que, assim como as neurotrofinas, a calicreína tecidual 6 humana também está superexpressa no SNC de portadores de EM e, ambas podem estar atuando entre si a fim de atingir a homeostase.