Avaliação de resistência aos antifúngicos e virulência em isolados de Candida tropicalis provenientes de infecções de corrente sanguínea

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Favarello, Larissa Molina [UNIFESP]
• Orientador(a): Melo, Analy Salles De Azevedo [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002s8w0
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Candida Tropicalis; MALDI-TOF MS; Resistência A Azólicos; Caenorhabditis Elegans; Virulência
• Palavras-chave em Inglês: Candida Tropicalis; MALDI-TOF MS; Azole Resistance; Caenorhabditis Elegans; Virulence
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7892271; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59289

Objetivo: Avaliar isolados de Candida tropicalis provenientes de infecção de corrente sanguínea, oriundas de centros médicos brasileiros incluídos em estudos de vigilância (2007-2018), quanto ao perfil de suscetibilidade a azólicos e caracterizar o potencial de virulência em modelo “in vivo” com o nematódeo Caenorhabditis elegans. Material e Métodos: Foram selecionados isolados clínicos armazenados no Banco de Micro-organismos do LEMI previamente identificados por métodos fenotípicos como Candida tropicalis. Os isolados foram descongelados e semeados nos meios ágar Sabouraud dextrose e em CHROMagar® Candida, para reativação e avaliação da pureza; A confirmação de espécie foi realizada através do método Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization - Time of Flight Mass (MALDI-TOF MS, Bruker®)utilizando protocolo de extração proteica com ácido fórmico a 25%; A suscetibilidade in vitro foi realizada com os antifúngicos: anfotericina B, fluconazol, voriconazol e anidulafungina através do método de microdiluição em caldo preconizado pelo Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI) utilizando o documento M27ED4. Concomitantemente, foi observada a prevalência de trailing com fenótipo low-high para os antifúngicos azólicos; A virulência foi avaliada utilizando a curva de sobrevida em exemplares de C. elegans infectados com cepas referência de C. tropicalis, C. albicans, C. auris e isolados clínicos de C. tropicalis de acordo com perfis de resistência aos azólicos. Resultados: Foram recuperados 200 isolados sequenciais de pacientes hospitalizados com hemoculturas positivas, os quais foram previamente identificados por métodos fenotípicos como C. tropicalis ao longo do período de 2007 a 2018; Foi realizado o sequenciamento de 21 isolados clínicos (10,5%) e da cepa referência C. tropicalis ATCC 750 para ampliação do banco proteico in-house; Os outros 179 isolados de C. tropicalis (89,5%) foram devidamente identificados utilizando o banco in house (MALDI-TOF MS); Quanto ao perfil de suscetibilidade, todos os isolados foram suscetíveis a anfotericina B, um isolado foi resistente a anidulafungina e foi constatado que 3,5% dos isolados presentes neste estudo eram não-suscetíveis aos azólicos; Para facilitar a análise, dividimos os isolados em dois períodos: P1 (2007-2012) e P2 (2013-2018). Em P1 (2007-2012) a taxa de resistência foi de 1,9% para fluconazol e 0% para voriconazol, sendo encontrado para P2 (2013-2018) taxa de resistência de 3,2% para fluconazol e 1% para voriconazol, não sendo observada diferença estatística (p=0.42); No ensaio de virulência em C. elegans, observou-se no segundo dia após a infecção que a sobrevida foi de 90% para C. auris, 50% para C. albicans, para C. tropicalis observou-se 20% de sobrevida com a cepa referência e 0% com o isolado clínico resistente (1534/17). Conclusões: (i) Foi possível identificar com acurácia pelo método proteico MALDI-TOF MS os isolados de C. tropicalis, depois de enriquecer o banco in-house; (ii) Foram encontrados 5 isolados de C. tropicalis com perfil de resistência aos antifúngicos azólicos; (iii) Comparando os períodos P1 e P2, observou-se tendência de aumento da taxa de resistência aos azólicos, porém não houve diferença estatística; (iv) Foi encontrado um isolado de C. tropicalis resistente a anidulafungina; (v) As curvas de sobrevida com C. elegans sugeriram que C. tropicalis, independente do perfil de suscetibilidade, foi mais virulenta que C. auris (P < 0.05).