As vias de Cdc42/N­-WASP e Rac1/WAVE2 na dinâmica de actina durante a invasão celular pelos amastigotas extracelulares de Trypanosoma cruzi

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Melo, Alexis de Sá Ribeiro do Bonfim de [UNIFESP]
• Orientador(a): Mortara, Renato Arruda [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002np6d
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Trypanosoma cruzi; Amastigotas extracelulares; Invasão celular; Actina; Gtpases
• Palavras-chave em Inglês: Trypanosoma cruzi; Extracellular amastigotes; Host cell invasion; Actin; Gtpases
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4231800; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47998

A invasão celular pelas formas amastigotas extracelulares (AE) de Trypanosoma cruzi é um processo altamente dependente do citoesqueleto de actina do hospedeiro cujos mecanismos celulares regulatórios ainda são pouco conhecidos. As GTPases Cdc42 e Rac1 são mediadores chave do citoesqueleto de actina ao promover a sua polimerização dependente do complexo Arp2/3 por meio da ativação das suas proteínas efetoras, N-WASP e WAVE2, respectivamente. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a participação das vias de Cdc42/N-WASP e Rac1/WAVE2 na dinâmica de actina durante a invasão celular pelos AEs em células HeLa. Utilizando ensaios com células vivas em microscópio confocal foi observado que Cdc42 e Rac1 são recrutadas e colocalizam com actina durante todo o processo de internalização dos AEs. O recrutamento foi mantido nos grupos expressando as isoformas mutantes ativas (CA) ou inativas (DN) das GTPases quando comparadas às isoformas nativas (WT). Já na invasão, quando comparados aos grupos controle, a expressão de Rac1 CA e Cdc42 WT aumentou o número de parasitos internalizados enquanto que a expressão Rac1 DN e Cdc42 CA reduziu. Adicionalmente, a invasão dos AEs é inibida em células depletadas para Rac1 e ensaios de recrutamento com essas células vivas mostraram atraso na invasão sem, entretanto, efetiva redução na quantidade de actina polimerizada nos sítios de invasão desses parasitos. Para as células depletadas para Cdc42 observamos inibição da invasão em alguns experimentos, porém nunhuma inibição em outros; os ensaios com células vivas não revelaram atraso no recrutamento de actina nesse grupo. Para as células depletadas para N-WASP e WAVE2 também foi observada inibição e retardo na internalização sem redução na polimeirização de actina. As duas proteínas também foram recrutadas e colocalizaram com actina nos sítios de invasão dos AEs. Por fim, a depleção das quatro proteínas estudadas não alterou a densidade ou morfologia das microvilosidades de membrana mobilizadas pelos AEs como observado por microscopia eletrônica de varredura. Os resutados confirmam a participação das vias de Cdc42/N-WASP e Rac1/WAVE2 na dinâmica de actina durante a invasão dos AEs e encorajam o estudo de outras proteínas possivelmente coatuando nessas vias.