Estudo ex vivo da ação do inibidor de Poli (ADP-ribose) polimerase (PARP) em células mononucleares do sangue periférico de pacientes com sepse por SARS-CoV-2

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Rodrigues, Larissa de Oliveira Cavalcanti Peres [UNIFESP]
• Orientador(a): Salomão, Reinaldo [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002q0rq
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Sepse; Poli (ADP-ribose) polimerase; Olaparibe; SARS-CoV-2
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/67472

Sepse, definida como uma disfunção orgânica potencialmente fatal causada por uma resposta desregulada do hospedeiro à infecção, é uma das principais causas de morbidade e mortalidade no mundo. Desde o primeiro semestre de 2020, a sepse viral se destacou devido à pandemia de COVID-19. A sepse é caracterizada por apresentar respostas concomitantes de inflamação excessiva e imunossupressão nos indivíduos. Como consequência da resposta disfuncional do hospedeiro frente à infecção, ocorre uma série de alterações celulares e metabólicas, entre elas, a super ativação da enzima PARP-1. Quando há ativação exacerbada, PARP-1 leva ao consumo exagerado de NAD+ que prejudica a função mitocondrial e produção de ATP, comprometendo a viabilidade celular. Assim, a inibição de PARP-1 pode contribuir com o equilíbrio metabólico. Olaparibe, um inibidor de PARP, tem sido avaliado como um potencial uso terapêutico para o tratamento de sepse. Objetivo: Avaliar os efeitos de olaparibe em células mononucleares isoladas do sangue periférico de pacientes com sepse por SARS-CoV-2. Métodos: Foram incluídos dezoito pacientes com sepse por SARS-CoV-2 e seis voluntários sadios pareados em idade e gênero. A atividade da enzima PARP-1 foi avaliada utilizando a técnica de western blot para detectar proteínas pariladas. Os efeitos de olaparibe foram avaliados na viabilidade celular por meio da identificação de células apoptóticas; na função mitocondrial, através da detecção do potencial de membrana mitocondrial; e na produção de citocinas, medidas por citometria de fluxo utilizando o sistema de matriz de esferas citométricas. Resultados: A enzima PARP-1 foi encontrada na forma íntegra (116 kDa) em indivíduos sadios e na forma clivada (89 kDa) em pacientes. Foi detectada maior quantidade de parilação em indivíduos sadios em comparação aos pacientes. O tratamento com olaparibe na concentração de até 100 µM não afetou a viabilidade das células. Essa mesma concentração preservou o potencial de membrana mitocondrial das células dos pacientes e dos sadios ao proteger contra a despolarização após estímulo com H2O2 250µM. O uso de olaparibe, nas concentrações 10 µM e 100 µM, não modulou a produção de citocinas inflamatórias pelas células dos pacientes com sepse por SARS-CoV-2. Conclusão: Olaparibe não prejudica a viabilidade celular, apresenta efeito benéfico na função mitocondrial, entretanto não possui efeitos na modulação de citocinas inflamatórias.