Funções celulares do complexo PARP9/DTX3L

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Ribeiro, Victória Chaves
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: ADP-ribosilação; ADP-ribosylation; DTX3L; interferon; Interferon; PARP14; PARP9; SARS-CoV-2
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11042025-114420/

Modificações pós-traducionais, como ubiquitinação e ADP-ribosilação, que consiste na adição de unidades de ADP-ribose catalisada por enzimas da família PARP, permitem uma sinalização celular rápida, importante para várias vias celulares, como reparo de DNA e resposta imune. Foi sugerido previamente que o heterodímero PARP9/DTX3L, com atividade ADP-ribosiltransferase e E3 ubiquitina ligase, poderia estar envolvido no reparo de DNA e/ou infecções virais, mas sua atividade fisiológica permanecia pouco conhecida. Por isto, o objetivo deste estudo foi identificar a função celular do complexo PARP9/DTX3L. Nós demonstramos aqui que PARP9 e DTX3L não parecem ter um papel proeminente no reparo de DNA em células humanas hTERT RPE-1, conforme avaliado pelo ensaio de sobrevivência clonogênica, formação de focos de yH2AX e 53BP1 e acúmulo de micronúcleos em células selvagens e knockout para DTX3L tratadas com agentes que induzem diferentes tipos de danos ao DNA. No entanto, nós mostramos um papel importante de PARP9/DTX3L na resposta interferon (IFN), um dos principais componentes da imunidade inata. Nesse contexto, o complexo PARP9/DTX3L é superexpresso e regula os níveis proteicos de outra ADPribosiltransferase, PARP14, sem afetar sua transcrição, conforme medido por RTqPCR e imunoblot. Em resposta a IFN, PARP14 se auto-ADP-ribosila, e trans-ADPribosila DTX3L e possivelmente outros alvos, conforme determinado por imunofluorescência e um pulldown para purificar proteínas ADP-ribosiladas do lisado celular. Esta ADP-ribosilação induzida por IFN forma pontos citoplasmáticos que colocalizam com PARP9, DTX3L, PARP14, p62 e ubiquitina, conforme avaliado por imunofluorescência. Dado que um subconjunto de vírus de RNA de fita positiva, como alfavírus e coronavírus, codificam um macrodomínio com atividade de ADPribosilhidrolase que potencialmente revertem a ADP-ribosilação induzida por IFN do hospedeiro, empregamos células que expressam ectopicamente o macrodomínio 1 do SARS-CoV-2 e observamos que este remove parcialmente a modificação que detectamos. Portanto, DTX3L e PARP14 são potenciais alvos celulares do macrodomínio 1 do SARS-CoV-2. Em conjunto, esses resultados indicam que, embora o complexo PARP9/DTX3L não tenha um papel proeminente no reparo de DNA em linhagens celulares humanas, ele parece ser um componente importante da resposta antiviral humana.