Validação e desenvolvimento do método de imunonefelometria em papel filtro para o diagnóstico da deficiência de alfa-1 antitripsina no Brasil
| Ano de defesa: | 2013 |
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| Tipo de documento: | Dissertação |
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Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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| Link de acesso: | https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22654 |
Resumo: | Introdução: A deficiência de alfa-1 antitripsina é uma desordem genética que resulta no aparecimento precoce de enfisema pulmonar e doença hepática. A Organização Mundial de Saúde e American Thoracic Society /European Respiratory Society preconizam que os pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica realizem o rastreamento para deficiência de alfa-1 antitripsina. No entanto, existe a necessidade de exames mais acessíveis para possibilitar a realização dessa orientação em países com extensa dimensão territorial, como o Brasil. A técnica em papel filtro é um procedimento simples, que tem sido amplamente utilizado para o rastreamento genético e diagnóstico de diversas doenças. Objetivo: Validação do método de dosagem de alfa-1 antitripsina por imunonefelometria em amostras de papel filtro em pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica no Brasil. Métodos: Foi analisada a dosagem da alfa-1 antitripsina plasmática e em papel filtro de 192 pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica. Para a análise o papel filtro (WhatmanTM, GE, 903, lot W101, USA) foi picotado em discos com diâmetro de 6 mm e, posteriormente, diluídos em 200 µL de soro fisiológico permanecendo a 4ºC durante 12 horas. Tanto as amostras de papel filtro quanto de plasma foram analisadas no equipamento da Siemens BNII pelo método de imunonefelometria. Resultados: O coeficiente de correlação entre a concentração de alfa-1 antitripsina sérica e no papel filtro foi de r= 0,45. Através da técnica de reamostragem “bootstrap” foi determinado um ponto de corte de 2,02 mg/dl, com um intervalo de confiança de 1,45 – 2,64 mg/dL (97%), para o papel filtro. Com o ponto de corte de 2,02 no papel filtro foi observado sensibilidade de 100%, especificidade de 95,7% e valor preditivo positivo de 27,2% e negativo de 100%. Conclusão: O método em papel filtro se mostrou uma ferramenta confiável para o rastreamento de pacientes com deficiência de alfa-1 antitripsina. Entretanto, recomenda-se que os indivíduos que apresentarem valores da alfa-1 antitripsina no papel filtro abaixo do valor máximo do intervalo de confiança (2,64 mg/dL) sejam investigados por meio de testes mais específicos, garantindo maior confiabilidade ao método. |
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Validação e desenvolvimento do método de imunonefelometria em papel filtro para o diagnóstico da deficiência de alfa-1 antitripsina no BrasilValidation of a immune nephelometric method on filter paper for the diagnosis of alpha 1 antitrypsin in BrazilHumanosDeficiência de alfa 1-AntitripsinaDoença Pulmonar Obstrutiva CrônicaTestes Diagnósticos de RotinaHumanosIntrodução: A deficiência de alfa-1 antitripsina é uma desordem genética que resulta no aparecimento precoce de enfisema pulmonar e doença hepática. A Organização Mundial de Saúde e American Thoracic Society /European Respiratory Society preconizam que os pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica realizem o rastreamento para deficiência de alfa-1 antitripsina. No entanto, existe a necessidade de exames mais acessíveis para possibilitar a realização dessa orientação em países com extensa dimensão territorial, como o Brasil. A técnica em papel filtro é um procedimento simples, que tem sido amplamente utilizado para o rastreamento genético e diagnóstico de diversas doenças. Objetivo: Validação do método de dosagem de alfa-1 antitripsina por imunonefelometria em amostras de papel filtro em pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica no Brasil. Métodos: Foi analisada a dosagem da alfa-1 antitripsina plasmática e em papel filtro de 192 pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica. Para a análise o papel filtro (WhatmanTM, GE, 903, lot W101, USA) foi picotado em discos com diâmetro de 6 mm e, posteriormente, diluídos em 200 µL de soro fisiológico permanecendo a 4ºC durante 12 horas. Tanto as amostras de papel filtro quanto de plasma foram analisadas no equipamento da Siemens BNII pelo método de imunonefelometria. Resultados: O coeficiente de correlação entre a concentração de alfa-1 antitripsina sérica e no papel filtro foi de r= 0,45. Através da técnica de reamostragem “bootstrap” foi determinado um ponto de corte de 2,02 mg/dl, com um intervalo de confiança de 1,45 – 2,64 mg/dL (97%), para o papel filtro. Com o ponto de corte de 2,02 no papel filtro foi observado sensibilidade de 100%, especificidade de 95,7% e valor preditivo positivo de 27,2% e negativo de 100%. Conclusão: O método em papel filtro se mostrou uma ferramenta confiável para o rastreamento de pacientes com deficiência de alfa-1 antitripsina. Entretanto, recomenda-se que os indivíduos que apresentarem valores da alfa-1 antitripsina no papel filtro abaixo do valor máximo do intervalo de confiança (2,64 mg/dL) sejam investigados por meio de testes mais específicos, garantindo maior confiabilidade ao método.Introduction: The deficiency of alpha-1 antitrypsin is a genetic disorder that results in early onset of emphysema and liver disease. The World Health Organization and American Thoracic Society /European Respiratory Society recommend that patients with chronic obstructive lung disease perform screening for alpha-1 antitrypsin deficiency. However, we see the need for testing more accessible, thus enabling the realization of this approach in countries with extensive territorial dimension, such as Brazil. A technical with dried blood spots is a simple method that has been widely used for genetic screening and diagnosis of various diseases. Objective: to determine the accuracy of the dried blood spots for quantifying alpha-1 antitrypsin concentrations by immunonephelometry in patients with chronic obstructive lung disease in Brazil. Method: Serum and dried blood spots samples were tested for alpha-1 antitrypsin in 192 patients with chronic obstructive lung disease. To prepare the dried blood spots perforated discs with a diameter of 6 mm were obtained from the paper filter (WhatmanTM, GE, 903, lot W101, USA) and then eluted with 200 µmL phosphatebuffered saline (pH 7.4) overnight at 4ºC. Serum and dried blood spots samples were determined using a rate immune nephelometric method (Siemens, BNII). Results: The correlation coefficient between the concentration of alpha-1 antitrypsin in serum and dried blood spots was r = 0.45. By resampling technique "bootstrap" determined a cutoff value of 2.02 mg / dl with a confidence interval 1.45 to 2.64 mg / dL (97%) to the filter paper. With a cutoff of 2.02 observed in dried blood spots sensitivity 100%, specificity 95.7% and positive predictive value of 27.2% and 100% negative. However, we recommend that individuals, who present values of alpha-1 antitrypsin in filter paper below the maximum value of the confidence interval (2.64 mg / dL), are investigated through more specific tests, ensuring greater reliability of the method. Conclusion: In view of the excellent sensitivity and specificity the dried blood spot quantitative assay is a reliable screening tool for the detection of patients with alpha1 antitrypsin deficiency. For the safety of not failing to diagnose a deficient individual we recommend that all individuals with values below the highest of the confidence interval value should be serum tested.BV UNIFESP: Teses e dissertaçõesAssociação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Jardim, José Roberto [UNIFESP]Nascimento, Oliver A. [UNIFESP]http://lattes.cnpq.br/2225674564595145http://lattes.cnpq.br/4320654878656075http://lattes.cnpq.br/1394071738006155Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Zillmer, Laura [UNIFESP]2015-12-06T23:46:03Z2015-12-06T23:46:03Z2013-03-27info:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion82fapplication/pdfapplication/pdfZILLMER, Laura. Validação e desenvolvimento do método de imunonefelometria em papel filtro para o diagnóstico da deficiência de alfa-1 antitripsina no Brasil. 2013. 82 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Translacional) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2013.Dissertação Completa - PDF A.pdfhttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22654ark:/48912/001300002kwq4porSão Pauloinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESP2024-09-16T10:43:28Zoai:repositorio.unifesp.br:11600/22654Repositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.unifesp.br/oai/requestbiblioteca.csp@unifesp.bropendoar:34652024-09-16T10:43:28Repositório Institucional da UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)false |
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