Estudos dos efeitos de concentrações crescentes de óxido nitrico no processo de morte por perda de adesão ao substrato (Anoikis): o papel desempenhado no processo pela proteína Src quinase

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Costa, Paulo Eduardo da [UNIFESP]
• Orientador(a): Monteiro, Hugo Pequeno [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001wtt8
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Morte celular; Anoikis; Óxido nítrico; Nitroprussiato de sódio; Metástase neoplásica
• Palavras-chave em Inglês: Cell death; Anoikis; Nitric oxide; Sodium nitroprusside; Neoplastic metastasis
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5010319; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50536

O estudo do processo de morte celular por perda de adesão (anoikis) é essencial para entendermos como as células tumorais metastáticas podem desenvolver resistência a este tipo de morte. Dentre uma série de fatores que podem influenciar a morte por anoikis, o papel do óxido nítrico (NO) ainda foi pouco explorado . Em células aderidas a matriz extracelular, sabe-se que o NO induz proliferação das mesmas quando produzido ou ofertado em baixas concentrações, ou morte celular quanto produzido ou ofertado em altas concentrações. Entretanto, em condições onde a aderência a matriz extracelular foi impedida, não se conhece o papel do NO. Em nosso estudo, observamos que células que sofrem perda de adesão comportam-se de forma bem diferente frente a esse radical livre. Nesta condição, baixas concentrações de NO induzem queda de viabilidade em células de tumor cervical humano HeLa, e elevação nos níveis de caspase-3 clivada. Já altas concentrações de NO induzem proteção contra a morte por anoikis, com aumento de viabilidade celular, diminuição da clivagem de caspase-3 e elevação nos níveis de expressão da proteína anti-apoptótica Bim. Src quinase desempenha papel central no processo, sendo fosforilada e nitrosilada após o tratamento com altas concentrações de NO e também, revertendo esta proteção induzida por altas concentrações de NO, principalmente quando a viabilidade celular e expressão da proteína Bim foram avaliadas. Ainda observamos que o NO em altas concentrações induziu desagregação celular dependente de Src em células HeLa. Os incrementos na viabilidade celular reproduziram-se em células da linhagem de melanoma murino Nex8h, que são capazes de metastatizar para os pulmões dos camundongos. O mesmo não se observou para as células da linhagem murina não metastática Nex10c. O processo de desagregação dependente do NO reproduziu-se tanto em células murinas metastáticas Nex8h, bem como não metastáticas Nex10c. Em relação à readesão celular, concentrações crescentes de NO induzem comprometimento do processo de readesão de forma concentração dependente. Src quinase não demonstrou função no processo. Sabemos que células tumorais muitas vezes produzem altas concentrações de NO. 11 Entendemos que o modelo experimental que desenvolvemos com o uso de concentrações crescentes de NO e uma condição que mimetiza a perda de adesão a matriz extracelular e pode contribuir significativamente para o entendimento de como células tumorais podem sobreviver ao processo de migração de um foco primário para um foco secundário (resistência a anoikis), readerir e sobreviver no foco secundário.