Expressão de proteínas reguladoras do ciclo celular em células endoteliais resistentes ao anoikis submetidas ao silenciamento gênico do sindecam-4

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Ferreira, Bianca Zaia Franco [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001dd43
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Anoikis; Ciclo celular; Sindecam-4; Resistência ao anoikis; Câncer
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/69041

Introdução e Objetivo: A remodelação da arquitetura do citoesqueleto durante o ciclo celular é crucial para uma divisão precisa. Apesar da importância do sindecam-4 (SDC4) em diversos eventos celulares, seu papel específico na desregulação do ciclo celular em células tumorais ainda não está completamente elucidado. Este trabalho buscou entender o papel do sindecam-4 na progressão e regulação do ciclo celular e no remodelamento do citoesqueleto em células endoteliais resistentes ao anoikis. Métodos: Células endoteliais selvagens (EC), EC resistentes ao anoikis (Adh1-EC), EC resistentes ao anoikis silenciadas para o gene do sindecam-4 (Adh-shRNA-Syn4-EC) e EC transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras EC) foram estudadas em relação à expressão de proteínas reguladoras expressas nas diferentes fases do ciclo como: CDKs, ciclinas, os inibidores p21 e p27, além de algumas proteínas do citoesqueleto. A expressão proteica foi avaliada por meio das técnicas de Western Blotting e Citometria de Fluxo, enquanto a análise do RNAm foi conduzida utilizando a técnica de qPCR. Além disso, a localização das proteínas foi investigada por meio da técnica de imunofluorescência, e a viabilidade celular foi avaliada por meio de um ensaio de resistência ao anoikis. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando o programa GraphPad Prism 6, com valor de significância p<0,05. Resultados: O silenciamento gênico do sindecam-4 diminuiu a taxa de proliferação. Isso ocorreu por meio da alta expressão de p27 e baixa expressão do complexo ciclina E-CDK2, que impedem a célula de avançar ao ponto R em direção a fase S do ciclo celular, confirmado pela diminuição da ciclina B1. Conclusões: O silenciamento do sindecam-4 resultou em um aumento na suscetibilidade das células ao processo de anoikis, indicando que sua regulação pode representar um alvo terapêutico promissor. Essa descoberta evidencia a capacidade do sindecam-4 em modular os processos relacionados ao desenvolvimento do câncer, destacando sua relevância como um potencial alvo terapêutico no combate a essa doença.