PVALB: análise do efeito da expressão ectópica em linhagens de carcinoma da tiroide

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Mendes, Thais Biude [UNIFESP]
• Orientador(a): Cerutti, Janete Maria [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/00130000294h3
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Neoplasias da glândula tireoide; Cálcio; Glândula tireoide
• Palavras-chave em Inglês: Thyroid neoplasms; Calcium; Gland thyroid
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3587750; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47960

O gene PVALB foi identificado pelo nosso grupo como um marcador de benignidade capaz de auxiliar o diagnóstico diferencial dos nódulos da tiroide, pois sua expressão encontra-se aumentada nos adenomas de Células de Hürthle (ACH), mas foram consistentemente negativas nos casos de Carcinomas Foliculares da Tiroide (CFT) Carcinomas de Células de Hürthle (CCH) e carcinomas papilíferos da Tiroide (CPT). O gene PVALB codifica uma proteína quelante de cálcio (Ca2+), cujo papel na gênese dos tumores da tiroide é desconhecido. Neste estudo, propomos caracterizar o papel de PVALB na patogênese dos tumores da tiroide. Para isso, o gene PVALB foi clonado em vetor de expressão fusionado a tag HA (HA-PVALB). Após transfecção permanente do vetor em duas linhagens celulares derivadas de carcinoma folicular da tiroide (WRO e FTC-133), e que não apresentam expressão endógena deste gene, avaliamos os efeitos biológicos e bioquímicos da expressão de PVALB nestas células. Utilizando indicadores específicos de Ca2+ livre Fluo-4, AM (citoplasma) e Rhod-2, AM (mitocôndria), avaliamos o fluxo de cálcio intracelular, após tratamento com tapsigargina, um inibidor seletivo da Ca2+-ATPase do retículo (SERCA). Posteriormente, avaliamos a morfologia das células por Microscopia Eletrônica de Transmissão. Para o potencial de membrana mitocondrial e a distribuição celular das mitocôndrias bem como a massa mitocondrial, utilizamos marcador fluorescente (MitoTracker red CMXRos). As imagens foram avaliadas por microscopia confocal. Também avaliamos os efeitos da expressão ectópica de PVALB nas taxas de proliferação, apoptose e senescência celular. Os níveis de proteínas de possíveis vias de sinalização relacionadas ao efeito biológico da expressão de PVALB foram analisadas por Western Blot. Posteriormente verificamos se a expressão de PVALB, nas amostras de tumores da tiroide está correlacionado com depósito de cálcio na células tumorais. Observamos que PVALB reduz as taxas de Ca2+ livre no citoplasma e na mitocôndria das células WRO. PVALB promove alteração no tamanho das células e na morfologia, número e distribuição das mitocôndrias no citoplasma das da células WRO e FTC-133. Além disso, a expressão de PVALB induziu a expressão de proteínas associadas ao estresse de retículo, bem como, reduziu a expressão de proteínas associas a via PI3K/AKT. Estes dados explicam, em parte, o efeito de PVALB na redução das taxas de proliferação celular e um aumento nas taxas de apoptose ou senescência. Ainda a expressão de PVALB está correlacionada com a presença de cálcio nas amostras de ACH, confirmando nossos resultados obtidos in vitro. Os dados sugerem que PVALB pode atuar como um gene supressor tumoral. A perda da expressão de PVALB nos carcinomas de tiroide pode representar um importante mecanismo associado a gênese e/ou progressão dos tumores da tiroide, especialmente os CCH.