Além da atividade proteolítica das metaloproteases: atividade imunomoduladora da Thimet oligopeptidase (TOP) no tratamento do melanoma murino B16F10Nex2

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: De Amat Herbozo, Carolina Cecilia [UNIFESP]
• Orientador(a): Rodrigues, Elaine Guadelupe [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Melanoma murino; B16F10-Nex2; Melanoma experimental; Receptor 4 Toll-Like; Imunomodulação; Metaloproteases; Camundongos endogâmicos C57BL
• Palavras-chave em Inglês: Melanoma murino; B16F10-Nex2; Melanoma, experimental; Toll-like receptor 4; Immunomodulation; Metalloproteases; Mice, inbred C57BL
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5081504; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50701

Estudos prévios realizados em nosso laboratório, revelaram que as metaloproteases bacterianas oligopeptidase A (OpdA) e arazima têm atividade antitumoral, independente da atividade proteolítica e mediado por um efeito imunomodulador capaz de ativar células apresentadoras de antígeno (APCs). Os resultados indicaram que a OpdA e a arazima poderiam ser reconhecidas pelas APCs devido a sua origem bacteriana, ou alternativamente que as propriedades descritas seriam características das metaloproteases em geral, independentemente da sua origem. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade imunomoduladora e antitumoral da thimet oligopeptidase (TOP), uma metalopeptidase murina, no modelo de melanoma murino B16F10-Nex2. A expressão e purificação da versão recombinante da TOP (rTOP) foi otimizada, e a forma inativa da enzima foi obtida por aquecimento. A rTOP não apresentou atividade citotóxica direta sobre as células de melanoma murino B16F10-Nex2 in vitro. Ensaios in vivo mostraram que a rTOP apresentou atividade antitumoral dose-dependente apenas no modelo metastático mas não no subcutâneo. O efeito foi independente da atividade proteolítica da enzima e dependente de uma resposta imune adaptativa funcional, pois foi abolida em animais imunodeficientes. A análise de citocinas no soro e nas culturas de células de baço e linfonodo reestimuladas ex vivo revelou um favorecimento da resposta Th1 tumor-específica nos animais tratados com rTOP. A forma ativa da metaloprotease estimulou um aumento de IFN-γ, enquanto que a forma inativa induziu uma inibição da produção de IL-10. Macrófagos e células dendríticas murinas derivados de progenitores de medula óssea (BMDM e BMDCs, respectivamente) foram ativados em presença de rTOP tanto ativa quanto inativa, resultando em um incremento da produção de NO, na secreção de citocinas IL-12p40, TNF-α e IL-10, e na expressão das moléculas coestimuladoras CD80, CD86 e CD40 na superfície das BMDCs. Ensaios em presença de polimixina B e após degradação com proteinase K demostraram que a atividade imunomoduladora da rTOP sobre as APCs não é devido ao LPS residual da preparação recombinante. Ensaios com células obtidas de camundongos geneticamente deletados, ou utilizando antagonistas e inibidores específicos, determinaram que a ativação de BMDCs é dependente da presença e função do receptor TLR4 e dos adaptadores MyD88 e TRIF, com participação das quinases JNK, p38 e MAP/ERK. Além disso, a via MyD88 foi essencial para o efeito antitumoral da rTOP no modelo de melanoma metastático in vivo. Em conclusão, a rTOP apresenta atividade antitumoral no modelo de melanoma metastático murino mediada por um efeito imunomodulador, e a ativação de APCs pela rTOP requer o mesmo receptor e vias de sinalização que as metaloproteases bacterianas estudadas anteriormente.