Papel do sindecam-4 no remodelamento da matriz extracelular em células endoteliais resistentes ao anoikis

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Sousa Onyeisi, Jessica Oyie [UNIFESP]
• Orientador(a): Lopes de Azevedo, Carla Cristina [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002vgk1
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Anoikis; Glicosaminoglicanos; Proteoglicanos de heparam sulfato; Sindecam-4; Matriz extracelular
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/65802

Objetivo: Estudar o papel do sindecam-4 no remodelamento da matriz extracelular e esclarecer suas interações com outras moléculas. Métodos: Células endoteliais de aorta de coelho resistentes ao anoikis submetidas ao silenciamento gênico do sindecam-4 (miR-Syn4-Adh-1-EC) foram estudadas comparando-se com células endoteliais de aorta de coelho resistentes ao anoikis parentais (Adh-EC), células endoteliais de aorta de coelho selvagens (EC) e células endoteliais de aorta de coelho transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras EC), em relação a: migração celular, angiogênese, biossíntese de glicosaminoglicanos sulfatados ao longo do ciclo celular, localização, expressão gênica e proteica das macromoléculas da MEC e das enzimas responsáveis pela degradação da MEC. Foi avaliada ainda a atividade das MMPs, a expressão dos TIMPs e da enzima óxido nítrico sintase endotelial (eNOS), bem como a produção de óxido nítrico (NO). A expressão gênica e proteica dos receptores de superfície celular (integrinas α5β1 e αVβ3) e das moléculas de sinalização celular: quinase de adesão focal (FAK) e SRC também foram analisadas. A migração celular foi avaliada pelo ensaio wound healing, a expressão gênica foi avaliada através da técnica de qPCR, a expressão e localização proteica através das técnicas de western blotting e imunofluorescência, respectivamente, a atividade das MMPs foi avaliada pela técnica de zimografia e a produção de NO foi avaliada pela reação de GREISS. Resultados: O silenciamento SDC4 levou à uma diminuição da migração e da capacidade angiogênica das células endoteliais resistentes ao anoikis. Em comparação com as células parentais (Adh1-EC), as células silenciadas SDC4 (miR-Syn-4-1-Adh1-EC e miR-Syn-4-2-Adh1-EC) exibiram um aumento na adesão celular à fibronectina. Além disso, a transfecção com miRNA-SDC4 levou a aumento na síntese de heparam sulfato após 12 horas de estímulo com soro fetal bovino (SFB). Após o silenciamento do SDC4, também observamos um aumento na expressão da fibronectina e do colágeno IV e uma diminuição na expressão das integrinas α5β1 e αVβ3. Além disso, as células silenciadas para o SDC4 apresentam um aumento na expressão de Src e FAK. Em relação à expressão das enzimas responsáveis pela degradação da MEC e seus reguladores, nós observamos uma diminuição na expressão da HPSE, da MMP2 e do TIMP2 após o silenciamento do SDC4. Também observamos que o silenciamento do SDC4 causou uma diminuição na produção de óxido nítrico e na expressão de eNOS. Conclusão: Os resultados apresentados ao longo do presente trabalho sugerem que o SDC4 tem um papel importante no remodelamento da matriz extracelular e também representam um passo importante para a compreensão do mecanismo pelo qual o SDC4 pode reverter o fenótipo transformado das células endoteliais resistentes ao anoikis.