Identificação e caracterização do estágio sexual de Plasmodium knowlesi utilizando análise bioinformática e parasitas transgênicos

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Vieira, Taís Baruel [UNIFESP]
• Orientador(a): Barros, Roberto Rudge de Moraes [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/0013000025mwx
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Plasmodium; CRISPR/Cas9; Edição genômica; Gametócito; Malária; scRNA-seq
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/69148

O objetivo deste trabalho foi criar linhagens repórter estáveis de Plasmodium knowlesi que facilitem o estudo das formas sexuadas e que permitam a execução de ensaios de ação de drogas mais eficientes. Para isso, efetuamos uma análise de dados gerados por scRNAseq, e escolhemos genes alvo para a edição genômica de P. knowlesi utilizando CRISPR/Cas9. Foram feitas três construções de DNA linear para a geração de três linhagens diferentes. A primeira é uma linhagem capaz de expressar a enzima bioluminescente NanoLuc constitutivamente, permitindo seu uso em ensaios de drogas para todas as fases do ciclo de vida do parasita. As outras duas linhagens devem expressar NanoLuc somente nos estágios sexuados (gametócitos), facilitando o estudo destas formas. Neste trabalho também apresentamos a análise de dados de sequenciamento de RNA de célula única de P. falciparum desenvolvida para identificar e caracterizar as formas sexuadas deste parasita. Isto permitiu a descoberta de novos genes e vias que podem ser usados como marcadores moleculares e como alvos de drogas e vacinas de bloqueio de transmissão. Essas análises identificaram um grupo intermediário de parasitas entre anéis sexualmente comprometidos e gametócitos de estágio I que não havia sido descrito anteriormente. Também foram identificados 32 novos genes de P. falciparum que têm potencial de serem utilizados como marcadores de gametócitos. Desses genes, a maior parte não tem função definida, abrindo espaço para estudos de caracterização e potencial desenvolvimento de novos métodos de boqueio de transmissão.