Papel do miR-23b e miR-133a no controle de expressão de componentes da via TRAIL de apoptose em células de adenocarcinoma de pulmão (A549) e carcinoma renal (CaKi-2) e na sensibilização de células A549 ao TRAIL

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Leite, Denise [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002pz9h
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Adenocarcinoma de pulmão; Carcinoma renal; MicroRNA; Apoptose
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/68672

Introdução: A despeito dos avanços nas terapias antineoplásicas, desenvolvimento de resistência tumoral é um dos principais desafios no tratamento do câncer. A via de apoptose desencadeada pelo TRAIL é potencial alvo terapêutico. Entretanto, resistência ao TRAIL é um fenômeno apresentado pela maioria das células tumorais. A translocação dos receptores TRAIL para o núcleo está relacionada à resistência ao TRAIL. Além dos receptores TRAIL (DR4 e DR5), as proteínas Apaf-1, CUL3 (culina- 3), CLTA/CLTC (cadeias A e C da clatrina) e KPNA-1 (subunidade da importina) são componentes da via TRAIL. Apaf-1 é parte integrante do apoptossomo. CUL3 é ligase regulatória da caspase 8. Clatrina é implicada na translocação e KPNA-1 na internalização nuclear dos receptores TRAIL. Compreender os mecanismos de resistência ao TRAIL é fundamental para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Evidências experimentais sugerem envolvimento do miR-23b e miR- 133a no controle da via TRAIL de apoptose. Objetivo: Em células humanas de adenocarcinoma de pulmão e carcinoma renal, verificar: papel do miR-23b e -133a na expressão de potenciais alvos da via TRAIL. Em células de adenocarcinoma de pulmão, verificar: a) papel do miR-23b e -133a na viabilidade celular e sensibilidade ao TRAIL; b) papel do miR-133a na compartimentalização celular dos receptores TRAIL. Métodos: cultura de células A549 (adenocarcinoma) e CaKi-2 (carcinoma renal) e seus respectivos controles (MRC-5 e HK2). PCR em tempo real (qRT-PCR) para avaliar expressão dos miRs de interesse e potenciais mRNAs-alvo. Expressão dos potenciais mRNAs-alvo após transfecção do inibidor do miR-23b e Mimic-133a. Em células A549: Western Blotting para verificação de expressão proteica de alvos encontrados para os miR-23b e -133a e da distribuição dos receptores TRAIL nos compartimentos nuclear e citoplasmático. Ensaio de viabilidade celular (MTT) após transfecção com inibidor do miR-23b e Mimic-133a com ou sem associação do estímulo TRAIL. Resultados e discussão: Ambas as linhagens (A549 e CaKi-2) foram resistentes ao TRAIL. Células A549: miR-23b foi superexpresso nas células A549 e sua inibição aumentou a expressão da Apaf-1 e CUL3, proteínas pró-apoptóticas. Células A549 não expressaram o miR-133a, e a transfecção do Mimic-133a diminuiu a expressão de CLTA e DR5. Ambas as estratégias (inibição do miR-23b e transfecção do Mimic- 133) sensibilizaram as células ao TRAIL. Os receptores DR4 e DR5 localizaram-se predominantemente no compartimento nuclear, o que pode representar um dos mecanismos de resistência ao TRAIL. Transfecção do Mimic-133a diminuiu a expressão da CLTA mas não alterou a distribuição dos receptores DR4 e DR5, sugerindo que a translocação dos receptores seja clatrina-independente. A combinação de Mimic-133a e TRAIL, por outro lado, promoveu maior concentração de ambos os receptores no compartimento nuclear em relação às células-controle, achado que necessitará investigação adicional. Células CaKi-2: a inibição do miR-23b não alterou a expressão dos mRNAs avaliados. Transfecção do Mimic-133a diminuiu a expressão da CLTA. Conclusão: Células A549: Ambos os miRs (-23b e -133a) têm participação na resistência das células tumorais ao TRAIL. O miR-23b controla a expressão de Apaf- 1 e CUL3, proteínas pró-apoptóticas, o que pode contribuir para a resistência ao TRAIL. Já a sensibilização ao TRAIL provocada pelo miR-133a deve ter seus mecanismos melhor estudados. Células CaKi-2: nenhum alvo foi encontrado para o miR-23b nas células CaKi-2, porém CLTA teve a expressão regulada pelo miR-133a. Embora necessitem de aprofundamento, nossos achados contribuem para maior entendimento da regulação da via TRAIL de apoptose e da resistência ao TRAIL.