Regulação Androgênica, Atividade Biológica e Sinalização Celular de Beta-Defensinas na Morfogênese do Epidídimo

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Ferreira, Lucas Garcia Alves [UNIFESP]
• Orientador(a): Winston, Maria Christina Werneck De Avellar [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/0013000020wd5
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Ducto Mesonéfrico; Morfogênese Do Epidídimo; Ação Androgênica; β-Defensinas; Imunidade Inata
• Palavras-chave em Inglês: Mesonephric Duct; Epididymal Morphogenesis; Androgen Action; β-Defensins; Innate Immunity
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7923851; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59884

Disfunções reprodutivas em homens adultos, um tópico de interesse da saúde pública, podem estar relacionadas a anormalidades no desenvolvimento e na masculinização do trato reprodutor masculino. O ducto mesonéfrico (ou ducto de Wolff) é uma estrutura embrionária submetida a um programa de morfogênese túbulo-epitelial induzido primariamente por androgênios para originar o epidídimo, um órgão essencial para maturação e função espermática. Anormalidades no desenvolvimento dessa estru-tura podem resultar em infertilidade na vida adulta, o que justifica a melhor compreensão dos mecanis-mos e mediadores que regem a morfogênese epididimária. Recentemente, nosso grupo identificou a β-defensina SPAG11C (sperm associated antigen 11 C), um componente da imunidade inata, como um fator mesenquimal, dependente de androgênio e regulador da morfogênese do ducto mesonéfrico de rato. Detectamos também a expressão de outras β-defensinas nesse tecido. Membros dessa família de proteí-nas podem exercer seus efeitos via sinalização celular induzida por receptores do tipo Toll (TLRs). Dessa forma, os objetivos do presente trabalho foram caracterizar o perfil de expressão e regulação androgênica de um conjunto de β-defensinas no ducto mesonéfrico, investigar aspectos funcionais da DEFB2 (de-fensin beta 2) e sua possível relação com a sinalização via TLR4 durante o desenvolvimento pré-natal do epidídimo, bem como validar uma abordagem experimental para detecção do processamento e secre-ção de β-defensinas recombinantes em cultura celular. Os resultados revelaram que as β-defensinas tes-tadas apresentaram perfis diferenciais de expressão gênica, regulação androgênica e distribuição celular durante o desenvolvimento pré-natal do epidídimo de rato. A β-defensina Defb4, homóloga da DEFB2 humana (hDEFB2), mostrou-se regulada negativamente entre os dias embrionários (e) 17,5 e 20,5, pe-ríodo em que ocorre a diferenciação morfológica do ducto mesonéfrico. Em ductos e17,5 que foram cultivados ex vivo por 96 h, a hDEFB2 recombinante reduziu o crescimento e o enovelamento do tecido ao aumentar a apoptose no epitélio e no mesênquima. Observamos também que a via de sinalização do TLR4 é funcional no ducto mesonéfrico e que sua ativação por LPS de E. coli é regulada negativamente pela hDEFB2. Além disso, validamos a metodologia de Western blot para detecção de produtos do pro-cessamento da SPAG11C em extrato celular e sobrenadante de culturas de células humanas transfectadas de forma transiente para essa β-defensina. Esses resultados apontam para a participação de componentes da imunidade inata no cenário de desenvolvimento do ducto mesonéfrico e ampliam o repertório funci-onal das β-defensinas no epidídimo e em eventos relacionados à fertilidade masculina.