Avaliação funcional da enzima conversora de Angiotensina I (ECA) através de mutações sítio- dirigidas

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Pereira, Larissa Miranda [UNIFESP]
• Orientador(a): Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002cs6r
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Enzima conversora de angiotensina; Mutação sítio-dirigida; Estrutura
• Palavras-chave em Inglês: Angiotensin converting enzyme; Structure
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3669832; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46224

A hipertensão é um problema de saúde mundial que vem surgindo na população como um dos maiores desafios da saúde pública e considerada um grande fator de risco de patologia cardiovascular e renal. Atualmente, vários estudos têm como foco o Sistema Renina Angiotensina (SRA), o qual é descrito como um sistema endócrino, autócrino, parácrino e intrácrino, onde a renina, uma aspartil endopeptidase, cliva o angiotensinogênio na ligação Leu10-Val11 e libera o decapeptídeo angiotensina I (AI), que é convertido em angiotensina II (AII), pela ação da Enzima Conversora de Angiotensina I (ECA). A ECA, por apresentar grande importância fisiológica, é uma enzima alvo de vários estudos terapêuticos e, desta forma, a busca pelo melhor entendimento de sua estrutura é o objetivo de muitos pesquisadores. Assim, o presente trabalho tem como objetivo geral investigar o papel de resíduos de aminoácidos da ECA na interação com o inibidor lisinopril localizados no sítio N-terminal da proteína, evidenciados durante os estudos da estrutura das isoformas N-domínio da ECA com 90 e 65 kDa, bem como, o papel desses aminoácidos na estabilidade e funcionalidade da enzima. Desta forma, os resíduos alvos deste projeto foram Ala361, Thr378 e Phe467 da ECA, fortes candidatos para a interação com os inibidores de ECA, lisinopril e captopril. Neste trabalho, mutamos estes resíduos de aminoácidos para alanina e analisamos o efeito da mutação com relação aos processos de interação enzima-ligante e atividade funcional da mesma. O resíduo Ala361 foi mutado para triptofano para verificarmos a importância espacial deste resíduo na enzima. Como resultado, obtivemos as três enzimas alteradas na região de interesse, com a presença de um pool cromatográfico, todas elas apresentando atividade em substrato específico de ECA, com perfil de estrutura bastante similar ao proposto na literatura. Mesmo sendo similares à ECA selvagem, as enzimas mutantes apresentaram diferenças na interação com substratos e inibidores específicos, demonstrando que essas regiões propostas são importantes na interação a estes, enfatizando a importância da isoforma N-domínio da enzima, considerada um possível marcador genético de hipertensão.