Determinação de resíduos de antimicrobianos clinicamente importantes e verificação de microrganismos resistentes em águas das Represas Guarapiranga e Billings, SP

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Santos, Felipe Rafael Guedes dos [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002h0nj
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Resistência antimicrobiana; Contaminantes emergentes; Águas superficiais; HPLC-DAD-FLD; TFME; Antimicrobial resistance; Emerging contaminants; Surface waters
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11600/71101

O uso indiscriminado de antibióticos na saúde humana e no crescimento de animais de criação levou à contaminação ambiental, especialmente das águas superficiais. Esse fato contribuiu para o aumento da resistência antimicrobiana, pois a exposição constante a subdoses de antibióticos pode criar uma pressão seletiva favorável à ocorrência e sobrevivência de bactérias resistentes, uma preocupação global da OMS. Novas abordagens que possibilitem o desenvolvimento de métodos de análise acessíveis e estudos associados à resistência antimicrobiana são prioridades para as agências ambientais estabelecerem programas de monitoramento desses compostos na água. Neste trabalho, foi desenvolvido um método utilizando cromatografia líquida de alta performance por absorção no ultravioleta e fluorescência (HPLC-DAD-FLD) para avaliação de antibióticos (amoxicilina, ceftazidima, cefalexina e ciprofloxacino) priorizados na região metropolitana de São Paulo e foi determinada a diversidade de espécies de bactérias gram-negativas resistentes a antimicrobianos clinicamente importantes nas águas das represas Billings e Guarapiranga. O método foi otimizado utilizando uma coluna RP18 Kinetex (150 mm x 4,6 mm, 5 µm). A fase móvel consistiu de água acidificada (pH 3,0):MeOH 25:75 (v/v), vazão 0,8 mLmin-1; 40ºC; detecção DAD a 237 nm e FLD (λex 350nm e λem 450nm). O LOD e LOQ variaram de 0,014 e 0,27 µg/mL e 0,044 e 0,83 µg/mL, respectivamente, para a faixa de 0,1-100 µg/mL. A avaliação da pré-concentração foi realizada por meio do SPE testando cartuchos HLB e Strata C-18 e a microextração em filme fino (TFME). As fases de extração PAN/C18; PAN/PS-DVB; PAN/C18/SCX e PAN/HLB foram testadas usando três solventes diferentes. PAN/PS-DVB apresentou melhor recuperação utilizando acetonitrila:água (25:75 v/v) como solvente de dessorção. Os testes de sensibilidade aos antimicrobianos foram realizados usando difusão em disco, de acordo com o BRCast. Espécies bacterianas foram selecionadas a partir de colônias recuperadas das represas e identificadas por MALDI-TOF. Cerca de 196 micro-organismos gram negativos foram isolados e identificados, com a presença de 6 diferentes famílias observadas. O perfil de sensibilidade das enterobactérias, considerado de prioridade crítica pela OMS, mostrou resistência a pelo menos um antimicrobiano de aminoglicosídeos, fluoroquinolonas e carbapenemas, respectivamente: Enterobacter spp. (24%, 54% e 67%), Escherichia coli (39%, 87% e 9,8%) e Klebsiella pneumoniae (100%, 50%, 77%). Foi observada triagem positiva para ESBL em isolados de E. coli (96%) e K. pneumoniae (46%). Essa abordagem permitiu a otimização dos esforços para o monitoramento de antibióticos na água, pois sua presença pode aumentar a taxa de transferência horizontal de genes de resistência entre diferentes cepas bacterianas, permitindo que bactérias sensíveis adquiram resistência aos antimicrobianos.