Galleria mellonella como modelo invertebrado hospedeiro de infecção para estudo do complexo Candida guilliermondii: análise de virulência
| Ano de defesa: | 2018 |
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Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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Resumo: | O gênero Candida é responsável pela maior parte das infecções fúngicas no ambiente hospitalar. Embora C. albicans continue a ser a espécie mais isolada em candidemia, há um aumento das infecções por espécies de Candida não-C. albicans, entre estas, àquelas causadas pelo complexo C. guilliermondii. Muito embora o potencial patogênico de C. guilliermondii já tenha sido demonstrado, há na literatura poucos estudos que tenham avaliado os mecanismos de virulência envolvidos durante o desenvolvimento da infecção por este complexo. OBJETIVOS: Avaliar putativas diferenças na virulência de isolados representativos das 2 espécies de relevância clínica pertencentes ao complexo C. guilliermondii (C. guilliermondii sensu stricto e C. fermentati) através da análise de formação de biofilme e curva de sobrevivência em modelo de infecção em Galleria mellonella. MATERIAL E MÉTODOS: Selecionou-se um total de 61 isolados do complexo C. guilliermondii obtidos de hemoculturas de pacientes com fungemia documentada em hospitais da América Latina no período de 2008-2016, cujas amostras estavam armazenadas no Banco de Microrganismos do Laboratório Especial de Micologia (LEMI), na Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Os isolados deste complexo foram previamente identificados por técnica de sequenciamento da região ITS do rDNA. Os ensaios de formação de biofilme foram realizados em placa de microtitulação e quantificados por coloração com cristal violeta. Infecção no modelo G. mellonella foi realizada utilizando-se inóculo de seis isolados representativos de cada espécie do complexo C. guilliermondii, sendo avaliada curva de sobrevivência dos invertebrados. RESULTADOS: Dentre os 61 isolados do complexo C. guilliermondii, 39 foram identificados e confirmados como C. guilliermondii (sensu stricto) e 22 como C. fermentati. Quanto à formação de biofilme pelos isolados de C. guilliermondii (sensu stricto), 12 (30,8%) foram classificados como baixo formadores, 20 (51,3%) intermediário e sete (17,9%) como alto formadores de biofilme. Já para C. fermentati, 4 isolados (16,7%) apresentaram baixa formação de biofilme, 12 (50%) e 8 isolados (33,3%) apresentaram capacidade intermediária e alta, respectivamente. Em modelo de infecção com G. mellonella observou-se que ambas as espécies foram capazes de desencadear processo infeccioso no hospedeiro invertebrado, não sendo documentada qualquer relação entre a curva de mortalidade dos animais e a maior ou menor produção de biofilme pelos isolados testados. CONCLUSÕES: O presente trabalho demonstrou que espécies de C. fermentati e C. guilliermondii sensu stricto apresentam características semelhantes de patogenicidade, ao menos em relação à produção de biofilme e à curva de morte em modelos invertebrados. |
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Mestradohttp://lattes.cnpq.br/7120403222585386http://lattes.cnpq.br/4512261018429681Luiz, Rita Angelica [UNIFESP]http://lattes.cnpq.br/5192568581590914Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Colombo, Arnaldo Lopes [UNIFESP]Souza, Ana Carolina Remondi [UNIFESP]São Paulo2020-03-25T11:44:01Z2020-03-25T11:44:01Z2018-11-28O gênero Candida é responsável pela maior parte das infecções fúngicas no ambiente hospitalar. Embora C. albicans continue a ser a espécie mais isolada em candidemia, há um aumento das infecções por espécies de Candida não-C. albicans, entre estas, àquelas causadas pelo complexo C. guilliermondii. Muito embora o potencial patogênico de C. guilliermondii já tenha sido demonstrado, há na literatura poucos estudos que tenham avaliado os mecanismos de virulência envolvidos durante o desenvolvimento da infecção por este complexo. OBJETIVOS: Avaliar putativas diferenças na virulência de isolados representativos das 2 espécies de relevância clínica pertencentes ao complexo C. guilliermondii (C. guilliermondii sensu stricto e C. fermentati) através da análise de formação de biofilme e curva de sobrevivência em modelo de infecção em Galleria mellonella. MATERIAL E MÉTODOS: Selecionou-se um total de 61 isolados do complexo C. guilliermondii obtidos de hemoculturas de pacientes com fungemia documentada em hospitais da América Latina no período de 2008-2016, cujas amostras estavam armazenadas no Banco de Microrganismos do Laboratório Especial de Micologia (LEMI), na Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Os isolados deste complexo foram previamente identificados por técnica de sequenciamento da região ITS do rDNA. Os ensaios de formação de biofilme foram realizados em placa de microtitulação e quantificados por coloração com cristal violeta. Infecção no modelo G. mellonella foi realizada utilizando-se inóculo de seis isolados representativos de cada espécie do complexo C. guilliermondii, sendo avaliada curva de sobrevivência dos invertebrados. RESULTADOS: Dentre os 61 isolados do complexo C. guilliermondii, 39 foram identificados e confirmados como C. guilliermondii (sensu stricto) e 22 como C. fermentati. Quanto à formação de biofilme pelos isolados de C. guilliermondii (sensu stricto), 12 (30,8%) foram classificados como baixo formadores, 20 (51,3%) intermediário e sete (17,9%) como alto formadores de biofilme. Já para C. fermentati, 4 isolados (16,7%) apresentaram baixa formação de biofilme, 12 (50%) e 8 isolados (33,3%) apresentaram capacidade intermediária e alta, respectivamente. Em modelo de infecção com G. mellonella observou-se que ambas as espécies foram capazes de desencadear processo infeccioso no hospedeiro invertebrado, não sendo documentada qualquer relação entre a curva de mortalidade dos animais e a maior ou menor produção de biofilme pelos isolados testados. CONCLUSÕES: O presente trabalho demonstrou que espécies de C. fermentati e C. guilliermondii sensu stricto apresentam características semelhantes de patogenicidade, ao menos em relação à produção de biofilme e à curva de morte em modelos invertebrados.The genus Candida is responsible for most of fungal infections in the hospital environment. Although C. albicans remains the most prevalent species in candidemia, there is an increase in infections by non-Candida albicans species, and among them, there are some species caused by the C. guilliermondii complex. Although the pathogenic potential of C. guilliermondii has already been demonstrated, there are few studies in the literature evaluating the mechanisms of virulence involved during the development of the infection by this complex. OBJECTIVES: To evaluate putative differences in the virulence of isolates representative of the two clinical relevance species belonging to the C. guilliermondii complex (C. guilliermondii sensu stricto and C. fermentati) through analysis of biofilm formation and survival curve in the Galleria mellonella infection model. MATERIALS AND METHODS: A total of 61 isolates of the C. guilliermondii complex obtained from blood cultures of patients with documented fungus in Latin American hospitals from 2008-2016 were selected from the Bank of Microorganisms of Laboratório (LEMI), at the Federal University of São Paulo (UNIFESP). Isolates from this complex were previously identified by Molecular Sequencing method using the ITS region. The biofilm formation assays were performed on a microtiter plate and quantified by staining with crystal violet. Infection in the G. mellonella model was performed using inoculum of six representative isolates of each C. guilliermondii complex species, and the survival curve of the invertebrates was evaluated. RESULTS: Among the 61 isolates of the C. guilliermondii complex, 39 were identified and confirmed as C. guilliermondii (sensu stricto) and 22 as C. fermentati. Regarding biofilm formation by C. guilliermondii (sensu stricto) isolates, 12 (30.8%) were classified as low formers, 20 (51.3%) intermediate and seven (17.9%) as high biofilm formers. For C. fermentati, 4 isolates (16.7%) presented low biofilm formation, 12 (50%) and 8 isolates (33.3%) presented intermediate and high capacity, respectively. In a model of infection using G. mellonella, it was observed that both species were able to trigger an infectious process in the invertebrate host, and no relationship between mortality curve of the animals and the greater or lesser biofilm production by the tested isolates was documented. CONCLUSIONS: The present work demonstrated that species of C. fermentati and C. guilliermondii sensu stricto present similar characteristics of pathogenicity, at least in relation to biofilm production and death curve in invertebrate models.Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2018)Coordenação e Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)70 f.https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6443220Dissertação - versão final - Rita Angélica Luiz.pdfhttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/52537ark:/48912/001300001xh8mporUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)info:eu-repo/semantics/openAccessComplexo candida guilliermondiiCandida fermentatiEpidemiologiaVirulênciaModelo invertebradoCandida guilliermondii complexCandida fermentatiEpidemiologyVirulenceInvertebrate modelGalleria mellonella como modelo invertebrado hospedeiro de infecção para estudo do complexo Candida guilliermondii: análise de virulênciaGalleria mellonella as an invertebrate infection host model for the study of the Candida guilliermondii complex: virulence analysisinfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESPSão Paulo, Escola Paulista de MedicinaMedicina TranslacionalCiências da SaúdeEpidemiologia de Infecções Emergentes e Seus Mecanismos de ResistênciaORIGINALRita Angélica Luiz - A.pdfRita Angélica Luiz - A.pdfDissertação de mestradoapplication/pdf462820https://repositorio.unifesp.br/bitstreams/97d396e6-b765-4bc2-8b3f-b30bc45407f6/downloadc7e3223d6d8b3de6739e9b640ad38448MD52TEXTRita Angélica Luiz - A.pdf.txtRita Angélica Luiz - A.pdf.txtExtracted texttext/plain116366https://repositorio.unifesp.br/bitstreams/827e0ece-3a57-48ce-814e-df55a8c94ee8/download921abc3b69966e223406b02f919b9b8cMD53THUMBNAILRita Angélica Luiz - A.pdf.jpgRita Angélica Luiz - A.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg2707https://repositorio.unifesp.br/bitstreams/62f914f5-b427-4318-a7d2-21f27128b4d5/download3c4e687d2ab64400fa2ef790e428e504MD5411600/525372024-08-10 12:49:42.072oai:repositorio.unifesp.br:11600/52537https://repositorio.unifesp.brRepositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.unifesp.br/oai/requestbiblioteca.csp@unifesp.bropendoar:34652024-08-10T12:49:42Repositório Institucional da UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)false |
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O gênero Candida é responsável pela maior parte das infecções fúngicas no ambiente hospitalar. Embora C. albicans continue a ser a espécie mais isolada em candidemia, há um aumento das infecções por espécies de Candida não-C. albicans, entre estas, àquelas causadas pelo complexo C. guilliermondii. Muito embora o potencial patogênico de C. guilliermondii já tenha sido demonstrado, há na literatura poucos estudos que tenham avaliado os mecanismos de virulência envolvidos durante o desenvolvimento da infecção por este complexo. OBJETIVOS: Avaliar putativas diferenças na virulência de isolados representativos das 2 espécies de relevância clínica pertencentes ao complexo C. guilliermondii (C. guilliermondii sensu stricto e C. fermentati) através da análise de formação de biofilme e curva de sobrevivência em modelo de infecção em Galleria mellonella. MATERIAL E MÉTODOS: Selecionou-se um total de 61 isolados do complexo C. guilliermondii obtidos de hemoculturas de pacientes com fungemia documentada em hospitais da América Latina no período de 2008-2016, cujas amostras estavam armazenadas no Banco de Microrganismos do Laboratório Especial de Micologia (LEMI), na Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Os isolados deste complexo foram previamente identificados por técnica de sequenciamento da região ITS do rDNA. Os ensaios de formação de biofilme foram realizados em placa de microtitulação e quantificados por coloração com cristal violeta. Infecção no modelo G. mellonella foi realizada utilizando-se inóculo de seis isolados representativos de cada espécie do complexo C. guilliermondii, sendo avaliada curva de sobrevivência dos invertebrados. RESULTADOS: Dentre os 61 isolados do complexo C. guilliermondii, 39 foram identificados e confirmados como C. guilliermondii (sensu stricto) e 22 como C. fermentati. Quanto à formação de biofilme pelos isolados de C. guilliermondii (sensu stricto), 12 (30,8%) foram classificados como baixo formadores, 20 (51,3%) intermediário e sete (17,9%) como alto formadores de biofilme. Já para C. fermentati, 4 isolados (16,7%) apresentaram baixa formação de biofilme, 12 (50%) e 8 isolados (33,3%) apresentaram capacidade intermediária e alta, respectivamente. Em modelo de infecção com G. mellonella observou-se que ambas as espécies foram capazes de desencadear processo infeccioso no hospedeiro invertebrado, não sendo documentada qualquer relação entre a curva de mortalidade dos animais e a maior ou menor produção de biofilme pelos isolados testados. CONCLUSÕES: O presente trabalho demonstrou que espécies de C. fermentati e C. guilliermondii sensu stricto apresentam características semelhantes de patogenicidade, ao menos em relação à produção de biofilme e à curva de morte em modelos invertebrados. |
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