Deleção e caracterização funcional do gene pksA codificador da enzima Policetídeo Sintase Tipo I em Fonsecaea pedrosoi

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2025
Autor(a) principal: Ribeiro, Elias el Shaddai dos Santos Nery Nunes
Orientador(a): Matos, Larissa Fernandes
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Link de acesso: http://repositorio.unb.br/handle/10482/54363
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2025.
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spelling Ribeiro, Elias el Shaddai dos Santos Nery NunesMatos, Larissa Fernandes2026-05-14T12:00:42Z2026-05-14T12:00:42Z2026-05-142025-05-15RIBEIRO, Elias el Shaddai dos Santos Nery Nunes. Deleção e caracterização funcional do gene pksA codificador da enzima Policetídeo Sintase Tipo I em Fonsecaea pedrosoi. 2025. 92 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Microbiana) — Universidade de Brasília, Brasília, 2025.http://repositorio.unb.br/handle/10482/54363Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2025.Fonsecaea pedrosoi é um fungo filamentoso melanizado e o principal agente causador da cromoblastomicose (CBM). CBM é uma micose subcutânea crônica e recalcitrante causada por implantação traumática e é considerada uma doença tropical negligenciada (DTN). A melanina é considerada um dos principais fatores de virulência conhecidos deste patógeno e é sintetizada pela via DHN-melanina (1,8-di-hidroxinaftaleno) e pode ser caracterizada por propriedades como: alto peso molecular, muito estável, carregada negativamente, resistente à degradação por ácidos, suscetível à degradação por bases fortes, hidrofóbica e insolúvel em solventes orgânicos. Esta via começa com o policetídeo 1,3,6,8-tri-hidroxinaftaleno (THN), seguido pela redução para scitalone, que é reduzida para vermelone e desidratada para DHN. Após esta etapa, a DHN é polimerizada para formar a melanina DHN. Para caracterizar os efeitos da melanina sintetizada via DHN-melanina em F. pedrosoi, o gene pksA da proteína policetídeo sintase tipo I, responsável pela primeira etapa da via biossintética da DHN, foi deletado por biolística. Cassetes de deleção foram construídos por reação em cadeia da polimerase de dupla junta (DJ-PCR) e vinte e cinco transformantes albinos foram obtidos, sendo oito confirmados para a deleção de pksA. Dois mutantes de diferentes transformações foram usados para avaliar o papel de pksA na biologia e patogenicidade de F. pedrosoi. Foi observado que o mutante ∆pks possui crescimento e germinação significativamente atrasados, bem como apresenta menor taxa de viabilidade dos conídios. Dentre os ensaios com estressores, o mutante apresentou maior sensibilidade ao estresse osmótico (KCl e Sorbitol), Oxidativo (Menadiona) e estresse de parede celular (CFW). Curiosamente, não foi observado diferença significativa na viabilidade conidial frente ao estresse com exposição a diferentes doses de UV. A melanina conferiu maior resistência à atividade fungicida, mesmo com macrófagos estimulados com LPS e LPS+IFNγ. Por fim, notou-se que a melanina exerce importante papel no aumento da patogenicidade de F. pedrosoi in vivo com Galleria mellonella.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF).Fonsecaea pedrosoi is a melanized filamentous fungus and the main causative agent of chromoblastomycosis (CBM). CBM is a chronic and recalcitrant subcutaneous mycosis caused by traumatic implantation and is considered a neglected tropical disease (NTD). Melanin is considered one of the main known virulence factors of this pathogen and is synthesized by the DHN-melanin (1,8-dihydroxynaphthalene) pathway and can be characterized by properties such as: high molecular weight, very stable, negatively charged, resistant to degradation by acids, susceptible to degradation by strong bases, hydrophobic and insoluble in organic solvents. This pathway begins with the cop 1,3,6,8-trihydroxynaphthalene (THN), applied by reduction to scitalone, which is reduced to vermelone and dehydrated to DHN. After this step, DHN is polymerized to form DHN melanin. To characterize the effects of melanin synthesized via DHN-melanin in F. pedrosoi, the pksA gene of the type I polio protein synthase, responsible for the first step of the DHN biosynthetic pathway, was deleted by biolistics. Deletion cassettes were constructed by double-joint polymerase chain reaction (DJ-PCR) and twenty-five albino transformants were found, eight of which were confirmed for pksA deletion. Two mutants from different transformations were used to evaluate the role of pksA in the biology and pathogenicity of F. pedrosoi. It was observed that the ∆pks mutant has significantly delayed growth and germination, as well as lower conidial prediction rates. Among the stressor assays, the mutant showed greater sensitivity to osmotic (KCl and Sorbitol), oxidative (Menadione) and cell wall stress (CFW). Interestingly, no significant difference was observed in the convenience of coping with stress with exposure to different doses of UV. Melanin conferred greater resistance to fungicidal activity, even with macrophages stimulated with LPS and LPS+IFNγ. Finally, it was noted that melanin plays an important role in increasing the pathogenicity of F. pedrosoi in vivo with Galleria mellonella.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Departamento de Biologia Celular (IB CEL)Programa de Pós-Graduação em Biologia MicrobianaporA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessDeleção e caracterização funcional do gene pksA codificador da enzima Policetídeo Sintase Tipo I em Fonsecaea pedrosoiinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisFonsecaea PedrosoiDHN-melaninaPks-1BiolísticaCadeia da Polimerase de Dupla Junta (DJ-PCR)reponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINALEliasElShaddaiDosSantosNeryNunesRibeiro_DISSERT.pdfapplication/pdf19638170http://repositorio.unb.br/bitstream/10482/54363/1/EliasElShaddaiDosSantosNeryNunesRibeiro_DISSERT.pdf4d28cf06c61cc325e8b2c987c0ee6455MD51open access10482/543632026-05-14 09:00:42.36open accessoai:repositorio.unb.br:10482/54363Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2026-05-14T12:00:42Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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