Obtenção dos ligantes à oligopeptidase B de trypanosoma cruzi

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2019
Autor(a) principal: Neves, Beatriz Pereira
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Trypanosoma cruzi
Oligopeptidase B
Identificação de ligantes - técnicas
Cromatografia por afinidade - pull-down
Link de acesso: https://repositorio.unb.br/handle/10482/35842
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2019.
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spelling Obtenção dos ligantes à oligopeptidase B de trypanosoma cruziTrypanosoma cruziOligopeptidase BIdentificação de ligantes - técnicasCromatografia por afinidade - pull-downDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2019.A oligopeptidase B foi primeiramente isolada de Escherichia coli, sua distribuição é restrita a bactérias Gram-negativas e positivas, eucariotos inferiores e plantas e não possui ortólogos em mamíferos, característica importante quando se pensa nesta protease como alvo de droga. Já foi demonstrado que a oligopeptidase B de Trypanosoma cruzi (OPBTc) participa do processo de infecção do parasito e tem sido cada vez mais mencionada como um importante fator de virulência para os tripanossomatídeos.. A identificação de substâncias com desempenho comprovado na OPBTc pode servir como molde para o desenho racional de inibidores mais eficazes e seguros, e portanto, com maior possibilidade de sucesso terapêutico. O presente projeto tem como objetivo geral obter os ligantes à oligopeptidase B de Trypanosoma cruzi com a finalidade de construir seu interatoma, e como objetivos específicos aprimorar as técnicas de identificação de ligantes. Para obtenção dos ligantes foram utilizadas várias metodologias, como a técnica de cromatografia por afinidade, pull-down, técnicas utilizando o cross-linking e o BN-PAGE, mostrando as diferenças e vantagens entre cada metodologia. No experimento de BN-PAGE demonstramos o padrão de migração da OPBTc recombinante e nativo, mostrando pela primeira vez a OPBTc como um dímero (160 kDa) em uma técnica eletroforética. Nos experimentos foi possível visualizar a presença de alguns possíveis complexos, que precisam ser levados para identificação e confirmação da funcionalidade desses complexos no processo de infecção do parasito ao hospedeiro, que poderá ser feito futuramente. Como perspectiva, posteriormente os ligantes/complexos da OPBTc poderão ser identificados pela técnica de espectrometria de massa e melhor estudados para a compreensão de como eles atuam na interação parasito-hospedeiro.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF).Oligopeptidase B (OPB) was first isolated from Escherichia coli, its distribution is restricted to Gram-negative and positive bacteria, lower eukaryotes and plants. OPB has no mammalian orthologues, an important feature for a drug target. Trypanosoma cruzi oligopeptidase B (OPBTc) has been shown to participate in the process of parasite infection and is frequently mentioned as an important virulence factor for trypanosomatids. Identification of molecules that affect OPBTc enzymatic activity can serve as a template for the rational design of safer and more effective inhibitors, and thus with greater possibility of therapeutic success. In this context, the aim of the present study was to obtain OPBTc ligands to construct its interatome. In the attempt to obtain the ligands, affinity chromatography, pull-down, BN-PAGE and cross-linking techniques were used. The methodologies used did not allow obtaining ligands. However, in the western blotting of the insoluble fraction obtained after the interaction of rOPBTc with the host cell, it was possible to see a band of higher molecular weight than expected, which may indicate an eventual interaction of the enzyme directly with the host cell. In the BN-PAGE experiment, we demonstrated the migration pattern of rOPBTc, showing for the first time OPBTc as a dimer (160 kDa) in an electrophoretic technique. Significant efforts have been made to understand the structural and functional properties of OPBTc, however its physiological role is still unknown and its natural substrate has not been identified.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Ciências MédicasSantana, Jaime Martins deMotta, Flávia NaderNeves, Beatriz Pereira2019-11-14T18:42:47Z2019-11-14T18:42:47Z2019-11-142019-08-29info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfNEVES, Beatriz Pereira. Obtenção dos ligantes à oligopeptidase B de trypanosoma cruzi . 2019. xii, 66 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) — Universidade de Brasília, Brasília, 2019.https://repositorio.unb.br/handle/10482/35842A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2025-01-15T19:24:13Zoai:repositorio.unb.br:10482/35842Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2025-01-15T19:24:13Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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