Análise genética e molecular do ceratocone envolvendo os genes VSX1, SOD1, TIMP3 e LOX

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Lopes, Alessandro Garcia
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Ceratocone; Córnea; VSX1; TIMP3; SOD1; LOX; Miopia; Astigmatismo; Keratoconus; Cornea; Myopia; Astigmatism
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/153175

O ceratocone é uma doença comum que acomete a córnea, afetando ambos os gêneros em todas as etnias e que pode se manifestar bilateralmente, de forma assimétrica. Por tratar-se de uma doença degenerativa, sua progressão pode ser rápida em diversas situações, acometendo 1 a cada 2.000 pessoas e resultando em severas alterações estruturais da córnea, as quais diminuem sua espessura e modificam sua curvatura normal para um formato mais cônico. O quadro clínico é composto por sintomas variados, destacando-se miopia e astigmatismo. Atualmente sabe-se que fatores genéticos e ambientais estão envolvidos no surgimento do ceratocone. Recentemente vários estudos genéticos têm como objetivo a identificação de mutações em genes que estejam diretamente ligados à doença, bem como seus papéis fisiológicos. Contudo, apesar dos esforços direcionados para o conhecimento dos aspectos genéticos, envolvendo diversos genes, ainda existem muitas dúvidas a respeito dos papéis destes na etiologia desta anomalia ocular. Assim, neste estudo, pretendeu-se identificar a presença de mutações e/ou polimorfismos nos genes VSX1, SOD1, TIMP3 e LOX, importantes candidatos à origem e desenvolvimento desta doença, a partir da análise pareada das sequências nucleotídicas de tecido da córnea e sangue periférico dos pacientes portadores desta patologia. As avaliações oftalmológicas incluíram exame clínico, topografia e tomografia. As amostras de DNA foram extraídas de sangue periférico e de fragmentos de córnea e as regiões codificantes dos genes foram amplificadas por reação em cadeia da polimerase (PCR), desnaturadas e submetidas a eletroforese em gel de poliacrilamida. Então, o rastreamento mutacional foi realizado através da técnica de SSCP (Single-Strand Conformation Polymorphism) seguido de sequenciamento direto. A metodologia específica de pesquisa utilizando-se fragmentos de córnea, desenvolvida para este estudo, é algo inédito, diante dos trabalhos os quais utilizam apenas sangue. Alguns SNPs (polimorfismos de nucleotídeo único) foram detectados nas regiões codificantes dos genes VSX1, SOD1 e TIMP3, em ambos os tecidos, mas esses SNPs não promovem alterações patogênicas nas estruturas das proteínas codificadas por esses genes, correspondendo a apenas trocas sinônimas de aminoácidos. Quanto ao gene LOX, foi detectado a ausência de qualquer polimorfismo, tanto em gel como no sequenciamento. Em relação aos polimorfismos encontrados, eles estavam concordantes em ambos os tecidos analisados, córnea e sangue. A ausência de alterações patogênicas nestes genes, obtida por este estudo em população brasileira, aliada aos resultados obtidos em outros estudos envolvendo outras populações mundiais, os quais também não encontraram mutações nestes genes, sugerem que outros fatores genéticos possam estar implicados no surgimento do ceratocone, sendo importante ressaltar também os fatores ambientais e comportamentais envolvidos tais como atopia, ato de coçar os olhos, luz ultravioleta e o uso excessivo de lentes de contato.