Validação de anticorpo monoclonal para detecção de vesículas extracelulares de plaquetas humanas

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Oliveira, Fernando Aparecido de [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Plaquetas; Vesículas extracelulares; Anticorpo monoclonal; Platelets; Extra-cellular vesicles; Monoclonal antibody
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/213585

A terapia transfusional, com o uso de sangue e componentes, é uma tecnologia de grande relevância na atualidade, colaborando para a melhoria e salvando vida de pacientes. No entanto, assim como outras intervenções terapêuticas, pode acarretar em complicações aguda ou tardias ao receptor. Dentre as indicações médicas de transfusão de hemocomponentes, destaca-se o Concentrado de Plaquetas (CP), obtido através de separação, por centrifugação de uma unidade de sangue total - (ST) ou por aférese. Esses hemocomponentes tem volume e quantidade de plaquetas diferentes dependendo da forma de preparo. Quanto ao armazenamento, devem ser mantidos em ambiente com temperatura de 20ºC a 24ºC, sob agitação constante e tem validade de 5 dias. A transfusão de concentrado de plaquetas ocorre diante da recorrência de plaquetopenia seja por falência medular e alto gasto de plaquetas ou por consumo ou destruição periférica. Este hemocomponentes precisam de rigoroso controle de qualidade. Este tipo de CQ tem alto valor agregado. Este trabalho validou anticorpo produzido com a finalidade de contribuir com tecnologia de ponta, baixo custo, no controle de qualidades destes hemocomponentes aumentando a segurança transfusional. Objetivo: Estabelecer novo método de controle de qualidade de plaquetas com finalidade transfusional compreendendo: 1) Caracterização e validação de anticorpos monoclonais dirigidos contra antígenos plaquetários humanos. 2) Estabelecer padrões de conformidade e não conformidade para a liberação de CP utilizando a tecnologia de monitoramento de VEs por Citometria de Fluxo e 3) Propor depósito de patente para o anticorpo monoclonal caracterizado. Resultados: Foram obtidos dos anticorpos monoclonais murinos (AcMm), após a fusão cellular, 3.125 híbridos, após a clonagem celular pela técnica de diluição limitante foram selecionados 2 clones. Um destes clones, o PAT1-10 A1 foi o selecionado para os testes de caracterização e eletroforese em gel de poliacrilamida e Western Blotting foram realizados. Para a corrida eletroforética foram usadas as proteínas extraídas da membrana plaquetária de 5 diferentes doadores. Da eletroforese 1D, em Gel de Poliacrilamida a 6% coradas com Azul de Coomassie, foi possível identificar o reconhecimento de proteína de alto peso molecular e subsequente as análises de proteômica, seguidas por citometria de fluxo com anticorpos monoclonais de especificidade anti-plaquetária, marcados com fluorocromo: anti-CD41-PE; ANTI-CD61-FITC e anti-CD62P – APC. Conclusão: Estabeleceu-se novo método de controle de qualidade de plaquetas com finalidade transfusional, baseado em citometria de fluxo com anticorpo monoclonal com a especificidade anti-fibrinogênio produzido home made e um imunossensor deverá ser construído e testado. Foi caracterizado o anticorpo monoclonal PAT1-10 A5, com especificidade anti fibrinogênio humano, molécula total.