Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína
Ano de defesa: | 2013 |
---|---|
Autor(a) principal: | |
Orientador(a): | |
Banca de defesa: | |
Tipo de documento: | Dissertação |
Tipo de acesso: | Acesso aberto |
Idioma: | por |
Instituição de defesa: |
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
|
Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
|
Departamento: |
Não Informado pela instituição
|
País: |
Não Informado pela instituição
|
Palavras-chave em Português: | |
Link de acesso: | http://hdl.handle.net/11449/110509 |
Resumo: | Peptidase enzymes are responsible for catalyze the cleavage of peptide bonds of other proteins. These enzymes present great importance, therefore, are used in several industrial segments, since the food industry even in the processing of leather and formulations of medicinal products. One major application of peptidases is in the dairy industry for cheese production, which initially involves clotting of milk caseins by the action of coagulant proteolytic enzymes being rennin the main one. Microbial rennet-like milk-clotting enzymes are aspartic proteinases that catalyze milk coagulation, substituting calf rennet. In previous study it was isolated a thermophilic fungus Thermomucor indicae-seudaticae N31 that produced on Solid State Fermentation (SSF), a peptidase with capacity to hydrolyses the k-casein of milk and produce good quality curd. However its functional characterization and specificity of action is not clear yet. Thus, in this study we continued the investigation of structure and action of this enzyme coagulant. Was carried out the monitoring of enzymatic hydrolysis of casein by high performance liquid chromatography-reverse phase, was analyzed the specificity of primary peptidase using substrate of fluorescence resonance energy transfer (FRET) peptide series Abz-LSFMAIQ-EDDnp and determined the primary sequence of the protein by mass spectrometry. Monitoring the enzymatic hydrolysis of casein by high performance liquid chromatography-reverse phase showed that the crude extract Thermomucor indicae-seudaticae N31 shows high similarity with commercial enzymes brands Bela-Vista and Chr-Hansen obtained from fungi Rhizomucor miehei and Aspergillus niger, respectively. The analysis of primary peptidase specificity demonstrated high specificity and affinity for the synthetic substrate. The determination of the cleavage site showed 46% hydrolysis of the bond between the amino acids phenylalanine and methionine and 54% between alanine ... |
id |
UNSP_507652fbfe50483615d7e8f74bb51c45 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.unesp.br:11449/110509 |
network_acronym_str |
UNSP |
network_name_str |
Repositório Institucional da UNESP |
repository_id_str |
|
spelling |
Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseínaMicrobiologia industrialEnzimas de fungos - Aplicações industriaisFungos termofilicosDerivados do leite - ProcessamentoCinetica de enzimasFermentação em estado sólidoCaseinaHidroliseEnzimas proteoliticasIndustrial microbiologyPeptidase enzymes are responsible for catalyze the cleavage of peptide bonds of other proteins. These enzymes present great importance, therefore, are used in several industrial segments, since the food industry even in the processing of leather and formulations of medicinal products. One major application of peptidases is in the dairy industry for cheese production, which initially involves clotting of milk caseins by the action of coagulant proteolytic enzymes being rennin the main one. Microbial rennet-like milk-clotting enzymes are aspartic proteinases that catalyze milk coagulation, substituting calf rennet. In previous study it was isolated a thermophilic fungus Thermomucor indicae-seudaticae N31 that produced on Solid State Fermentation (SSF), a peptidase with capacity to hydrolyses the k-casein of milk and produce good quality curd. However its functional characterization and specificity of action is not clear yet. Thus, in this study we continued the investigation of structure and action of this enzyme coagulant. Was carried out the monitoring of enzymatic hydrolysis of casein by high performance liquid chromatography-reverse phase, was analyzed the specificity of primary peptidase using substrate of fluorescence resonance energy transfer (FRET) peptide series Abz-LSFMAIQ-EDDnp and determined the primary sequence of the protein by mass spectrometry. Monitoring the enzymatic hydrolysis of casein by high performance liquid chromatography-reverse phase showed that the crude extract Thermomucor indicae-seudaticae N31 shows high similarity with commercial enzymes brands Bela-Vista and Chr-Hansen obtained from fungi Rhizomucor miehei and Aspergillus niger, respectively. The analysis of primary peptidase specificity demonstrated high specificity and affinity for the synthetic substrate. The determination of the cleavage site showed 46% hydrolysis of the bond between the amino acids phenylalanine and methionine and 54% between alanine ...Peptidases são enzimas responsáveis por realizar a clivagem de ligações peptídicas de outras proteínas e peptídeos. Essas enzimas apresentam grande importância, pois são utilizadas em vários segmentos industriais, desde a indústria alimentícia até mesmo no processamento de couro e pele e formulações de medicamentos. Uma das principais aplicações das peptidases é nos laticínios, na produção de queijo, que inicialmente envolve a coagulação das caseínas do leite pela ação de enzimas proteolíticas coagulantes, sendo a renina a principal delas. Enzimas microbianas coagulantes de leite são peptidases aspárticas que catalisam a coagulação do leite, substituindo o coalho de vitelo. Em trabalhos anteriores foi isolado o fungo termofílico Thermomucor indicae-seudaticae N31 que produziu em fermentação em estado sólido (FES), uma peptidase com capacidade de hidrolisar a κ-caseína do leite e produzir coágulo de boa qualidade. Entretanto, sua caracterização funcional e especificidade de ação ainda não estão claras. Assim, neste estudo, deu-se continuidade à investigação de estrutura e ação desta enzima coagulante. Foi realizado o monitoramento da hidrólise enzimática da caseína por cromatografia líquida de alta eficiência, foi feita análise da especificidade primária da peptidase utilizando substrato de fluorescência da série Abz-LSFMAIQ-EDDnp e foi determinada a sequência primária da proteína por espectrometria de massas. O monitoramento da hidrólise enzimática da caseína por cromatografia líquida de alta eficiência mostrou que o perfil do extrato bruto de Thermomucor indicae-seudaticae N31 apresenta alta similaridade com as enzimas comerciais das marcas Bela-Vista e Chr-Hansen obtidas dos fungos Rhizomucor miehei e Aspergillus niger, respectivamente. A análise de especificidade primária da peptidase demonstrou alta especificidade e afinidade pelo substrato sintético. A determinação do ...Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Universidade Estadual Paulista (Unesp)Silva, Roberto da [UNESP]Universidade Estadual Paulista (Unesp)Geraldes, Fernanda Martucci [UNESP]2014-11-10T11:09:48Z2014-11-10T11:09:48Z2013-08-23info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis65 f. : il. color., grafs., tabs.application/pdfGERALDES, Fernanda Martucci. Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína. 2013. 65 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho, Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas, 2013.http://hdl.handle.net/11449/110509000786749000786749.pdf33004153070P39424175688206545Alephreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPporinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-01-12T06:29:01Zoai:repositorio.unesp.br:11449/110509Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462024-01-12T06:29:01Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false |
dc.title.none.fl_str_mv |
Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína |
title |
Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína |
spellingShingle |
Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína Geraldes, Fernanda Martucci [UNESP] Microbiologia industrial Enzimas de fungos - Aplicações industriais Fungos termofilicos Derivados do leite - Processamento Cinetica de enzimas Fermentação em estado sólido Caseina Hidrolise Enzimas proteoliticas Industrial microbiology |
title_short |
Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína |
title_full |
Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína |
title_fullStr |
Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína |
title_full_unstemmed |
Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína |
title_sort |
Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína |
author |
Geraldes, Fernanda Martucci [UNESP] |
author_facet |
Geraldes, Fernanda Martucci [UNESP] |
author_role |
author |
dc.contributor.none.fl_str_mv |
Silva, Roberto da [UNESP] Universidade Estadual Paulista (Unesp) |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Geraldes, Fernanda Martucci [UNESP] |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Microbiologia industrial Enzimas de fungos - Aplicações industriais Fungos termofilicos Derivados do leite - Processamento Cinetica de enzimas Fermentação em estado sólido Caseina Hidrolise Enzimas proteoliticas Industrial microbiology |
topic |
Microbiologia industrial Enzimas de fungos - Aplicações industriais Fungos termofilicos Derivados do leite - Processamento Cinetica de enzimas Fermentação em estado sólido Caseina Hidrolise Enzimas proteoliticas Industrial microbiology |
description |
Peptidase enzymes are responsible for catalyze the cleavage of peptide bonds of other proteins. These enzymes present great importance, therefore, are used in several industrial segments, since the food industry even in the processing of leather and formulations of medicinal products. One major application of peptidases is in the dairy industry for cheese production, which initially involves clotting of milk caseins by the action of coagulant proteolytic enzymes being rennin the main one. Microbial rennet-like milk-clotting enzymes are aspartic proteinases that catalyze milk coagulation, substituting calf rennet. In previous study it was isolated a thermophilic fungus Thermomucor indicae-seudaticae N31 that produced on Solid State Fermentation (SSF), a peptidase with capacity to hydrolyses the k-casein of milk and produce good quality curd. However its functional characterization and specificity of action is not clear yet. Thus, in this study we continued the investigation of structure and action of this enzyme coagulant. Was carried out the monitoring of enzymatic hydrolysis of casein by high performance liquid chromatography-reverse phase, was analyzed the specificity of primary peptidase using substrate of fluorescence resonance energy transfer (FRET) peptide series Abz-LSFMAIQ-EDDnp and determined the primary sequence of the protein by mass spectrometry. Monitoring the enzymatic hydrolysis of casein by high performance liquid chromatography-reverse phase showed that the crude extract Thermomucor indicae-seudaticae N31 shows high similarity with commercial enzymes brands Bela-Vista and Chr-Hansen obtained from fungi Rhizomucor miehei and Aspergillus niger, respectively. The analysis of primary peptidase specificity demonstrated high specificity and affinity for the synthetic substrate. The determination of the cleavage site showed 46% hydrolysis of the bond between the amino acids phenylalanine and methionine and 54% between alanine ... |
publishDate |
2013 |
dc.date.none.fl_str_mv |
2013-08-23 2014-11-10T11:09:48Z 2014-11-10T11:09:48Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
GERALDES, Fernanda Martucci. Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína. 2013. 65 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho, Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas, 2013. http://hdl.handle.net/11449/110509 000786749 000786749.pdf 33004153070P3 9424175688206545 |
identifier_str_mv |
GERALDES, Fernanda Martucci. Caracterização bioquímica e funcional da ação da peptidase de Thermomucor indicae-seudaticae N31 sobre a caseína. 2013. 65 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho, Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas, 2013. 000786749 000786749.pdf 33004153070P3 9424175688206545 |
url |
http://hdl.handle.net/11449/110509 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
65 f. : il. color., grafs., tabs. application/pdf |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Estadual Paulista (Unesp) |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Estadual Paulista (Unesp) |
dc.source.none.fl_str_mv |
Aleph reponame:Repositório Institucional da UNESP instname:Universidade Estadual Paulista (UNESP) instacron:UNESP |
instname_str |
Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
instacron_str |
UNESP |
institution |
UNESP |
reponame_str |
Repositório Institucional da UNESP |
collection |
Repositório Institucional da UNESP |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1800401483662884864 |