Atividade antibiofilme do extrato de Psidium guajava L. sobre Enterococcus faecalis e Candida albicans
| Ano de defesa: | 2025 |
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| Tipo de documento: | Dissertação |
| Tipo de acesso: | Acesso aberto |
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| Instituição de defesa: |
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Palavras-chave em Português: | |
| Palavras-chave em Inglês: | |
| Link de acesso: | https://hdl.handle.net/11449/261776 |
Resumo: | A resistência microbiana é um fator preocupante na saúde mundial, inclusive no campo da odontologia. Os microrganismos Enterococcus faecalis e Candida albicans estão normalmente relacionados ao insucesso do tratamento endodôntico devido à resistência aos meios de descontaminação. Esse trabalho objetivou: I) produzir e avaliar fitoquimicamente o extrato de Psidium guajava L. (goiabeira); II) Avaliar a ação antimicrobiana e antibiofilme sobre cepas ATCC e clínicas de Enterococcus faecalis e Candida albicans, comparando com hipoclorito de sódio e clorexidina; III) avaliar a citotoxicidade e genotoxicidade do extrato em linhagem de queratinócitos humanos (HaCaT). Para tanto, o extrato foi preparado e caracterizado fitoquimicamente por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-DAD), a ação antioxidante foi avaliada e o teor de flavonoides e fenóis determinados. A atividade antimicrobiana foi analisada pelo teste de microdiluição em caldo (CLSI M27-S4 para C. albicans) e (CLSI M7-A9 para E. faecalis) para determinar concentração inibitória mínima (CIM) e concentração microbicida mínima (CMM). As concentrações mais efetivas foram analisadas em biofilmes monotípicos formados em 48 horas que foram tratados com o extrato de P. guajava L. pelo tempo de contato de 10 minutos e quantificada a viabilidade pelo teste colorimétrico de MTT. A linhagem de queratinócitos humanos (HaCaT) foi utilizada para avaliação de citotoxicidade e genotoxicidade, com o emprego do teste colorimétrico de Alamar Blue e micronúcleos, respectivamente. Os dados foram analisados por Anova one-way e Tukey ou Kruskal Walis e Dunn considerando o nível de significância (p≥0,05), de acordo com o teste de normalidade. A análise cromatográfica mostrou picos de rutina, quercitina e kaempeferol no extrato vegetal e para eliminar 50% dos radicais livres é necessário 10,39 µg/mL do mesmo. O teor de sólidos solúveis foi quantificado em 3,35%, a concentração de flavonoides foi de 0,130 mg/mL e 1,770 de fenóis. O extrato apresentou ação bactericida e antifúngica contra todas as cepas estudadas, sendo a CMM de 1,0 mg/mL para E. faecalis ATCC e clínica (cepa 4), de 2,0 mg/mL para E. faecalis clínica (cepa 2), C. albicans clínica (cepas 14 e 60) e 8,3 mg/mL para C. albicans ATCC. Na análise antibiofilme a concentração de 8,3 mg/mL demonstrou porcentagens de redução acima de 50% para todas as cepas estudadas. Sendo as melhores porcentagens de redução de biofilme obtidas na concentração de 8,3 mg/mL que reduziu 69,27% do biofilme e 2 mg/mL que reduziu 61,24% ambos para E. faecalis clínica (cepa 4). O extrato de P. guajava L. não foi citotóxico e nem produziu alteração no material genético dos queratinócitos. Portanto é possível concluir que o extrato de P. guajava L. possui ação antimicrobiana e antibiofilme sobre E. faecalis e C. albicans, possui boa ação antioxidante e não é citotóxico,nem genotóxico para queratinócitos humanos (Hacat). |
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Carvalho, Lara Steffany de [UNESP]Universidade Estadual Paulista (Unesp)Domiciano-Meccatti, Vanessa Marques [UNESP]Oliveira, Luciane Dias de [UNESP]2025-03-07T18:37:48Z2025-03-07T18:37:48Z2025-02-21https://hdl.handle.net/11449/26177633004145070P822430089634108400000-0002-3166-8180A resistência microbiana é um fator preocupante na saúde mundial, inclusive no campo da odontologia. Os microrganismos Enterococcus faecalis e Candida albicans estão normalmente relacionados ao insucesso do tratamento endodôntico devido à resistência aos meios de descontaminação. Esse trabalho objetivou: I) produzir e avaliar fitoquimicamente o extrato de Psidium guajava L. (goiabeira); II) Avaliar a ação antimicrobiana e antibiofilme sobre cepas ATCC e clínicas de Enterococcus faecalis e Candida albicans, comparando com hipoclorito de sódio e clorexidina; III) avaliar a citotoxicidade e genotoxicidade do extrato em linhagem de queratinócitos humanos (HaCaT). Para tanto, o extrato foi preparado e caracterizado fitoquimicamente por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-DAD), a ação antioxidante foi avaliada e o teor de flavonoides e fenóis determinados. A atividade antimicrobiana foi analisada pelo teste de microdiluição em caldo (CLSI M27-S4 para C. albicans) e (CLSI M7-A9 para E. faecalis) para determinar concentração inibitória mínima (CIM) e concentração microbicida mínima (CMM). As concentrações mais efetivas foram analisadas em biofilmes monotípicos formados em 48 horas que foram tratados com o extrato de P. guajava L. pelo tempo de contato de 10 minutos e quantificada a viabilidade pelo teste colorimétrico de MTT. A linhagem de queratinócitos humanos (HaCaT) foi utilizada para avaliação de citotoxicidade e genotoxicidade, com o emprego do teste colorimétrico de Alamar Blue e micronúcleos, respectivamente. Os dados foram analisados por Anova one-way e Tukey ou Kruskal Walis e Dunn considerando o nível de significância (p≥0,05), de acordo com o teste de normalidade. A análise cromatográfica mostrou picos de rutina, quercitina e kaempeferol no extrato vegetal e para eliminar 50% dos radicais livres é necessário 10,39 µg/mL do mesmo. O teor de sólidos solúveis foi quantificado em 3,35%, a concentração de flavonoides foi de 0,130 mg/mL e 1,770 de fenóis. O extrato apresentou ação bactericida e antifúngica contra todas as cepas estudadas, sendo a CMM de 1,0 mg/mL para E. faecalis ATCC e clínica (cepa 4), de 2,0 mg/mL para E. faecalis clínica (cepa 2), C. albicans clínica (cepas 14 e 60) e 8,3 mg/mL para C. albicans ATCC. Na análise antibiofilme a concentração de 8,3 mg/mL demonstrou porcentagens de redução acima de 50% para todas as cepas estudadas. Sendo as melhores porcentagens de redução de biofilme obtidas na concentração de 8,3 mg/mL que reduziu 69,27% do biofilme e 2 mg/mL que reduziu 61,24% ambos para E. faecalis clínica (cepa 4). O extrato de P. guajava L. não foi citotóxico e nem produziu alteração no material genético dos queratinócitos. Portanto é possível concluir que o extrato de P. guajava L. possui ação antimicrobiana e antibiofilme sobre E. faecalis e C. albicans, possui boa ação antioxidante e não é citotóxico,nem genotóxico para queratinócitos humanos (Hacat).Antimicrobial resistance is a concern in global health, including in the field of dentistry. The microorganisms Enterococcus faecalis and Candida albicans are usually related to the failure of endodontic treatment due to resistance to decontamination agents. This study aimed to: I) produce and phytochemically evaluate the extract of Psidium guajava L. (guava); II) evaluate the antimicrobial and antibiofilm action on ATCC and clinical strains of Enterococcus faecalis and Candida albicans, comparing it with sodium hypochlorite and chlorhexidine; III) evaluate the cytotoxicity and genotoxicity of the extract in human keratinocyte cell lines (HaCaT). For this purpose, the extract was prepared and phytochemically characterized by high-performance liquid chromatography (HPLC-DAD), the antioxidant action was evaluated, and the content of flavonoids and phenols were determined. The antimicrobial activity was analyzed by the broth microdilution test (CLSI M27-S4 for C. albicans) and (CLSI M7-A9 for E. faecalis) to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum microbicidal concentration (MMC). The most effective concentrations were analyzed in monotypic biofilms formed in 48 hours that were treated with P. guajava L. extract for a contact time of 10 minutes and the viability was quantified by the MTT colorimetric test. The human keratinocyte cell line (HaCaT) was used to evaluate cytotoxicity and genotoxicity, using the Alamar Blue colorimetric test and micronucleus, respectively. The data were analyzed by one-way ANOVA and Tukey or Kruskal Walis and Dunn considering the significance level (p≥0.05), according to the normality test. The chromatographic analysis showed peaks of rutin, quercitin and kaempeferol in the plant extract and to eliminate 50% of the free radicals, 10.39 µg/mL of the same is necessary. The content of soluble solids was quantified at 3.35%, the concentration of flavonoids was 0.130 mg/mL and 1.770 of phenols. The extract showed bactericidal and antifungal action against all the strains studied, with the MMC of 1.0 mg/mL for E. faecalis ATCC and clinical (strain 4), 2.0 mg/mL for E. faecalis clinical (strain 2), C. albicans clinical (strains 14 and 60) and 8.3 mg/mL for C. albicans ATCC. In the antibiofilm analysis, the concentration of 8.3 mg/mL demonstrated reduction percentages above 50% for all strains studied. The best biofilm reduction percentages were obtained at the concentration of 8.3 mg/mL, which reduced 69.27% of the biofilm, and 2 mg/mL, which reduced 61.24%, both for clinical E. faecalis (strain 4). The P. guajava L. extract was not cytotoxic and did not produce changes in the genetic material of keratinocytes. Therefore, it is possible to conclude that the P. guajava L. extract has antimicrobial and antibiofilm action on oral microorganisms, has good antioxidant action and is not cytotoxic or genotoxic for human keratinocytes (Hacat).Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)CAPES: 88887.829809/2023-00porUniversidade Estadual Paulista (Unesp)Candida albicansBiofilmeFitoterapiaCandida albicansBiofilmsPhytotherapyAtividade antibiofilme do extrato de Psidium guajava L. sobre Enterococcus faecalis e Candida albicansAntibiofilm activity of Psidium guajava L. extract against Enterococcus faecalis and Candida albicansinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPCiências Aplicadas à Saúde Bucal - ICTMicrobiologia e imunologiaAgentes antimicrobianos e métodos de controle para infecções de interesse médico-odontológicoUniversidade Estadual Paulista (UNESP), Instituto de Ciência e Tecnologia, São José dos Campos18 meses após a data da defesaBanca públicaPublicationc73b286a-b5fa-4312-a7ec-62f987e7b514virtual::277912-1c73b286a-b5fa-4312-a7ec-62f987e7b514virtual::277912-189f7316b-2a3d-470c-bd4e-bdbc67809adevirtual::273759-189f7316b-2a3d-470c-bd4e-bdbc67809adevirtual::273759-1TEXTcarvalho_ls_me_sjc_int.pdf.txtWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.TikaTextExtractionFilter on 2025-03-07T21:10:23Z (GMT).Extracted texttext/plain102299https://repositorio.unesp.br/bitstreams/602e21bd-30ef-405f-9c79-02d13224d161/downloade8e1c096d33030a37af678a53e9b7238MD55falseAnonymousREADcarvalho_ls_me_sjc_par.pdf.txtWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.TikaTextExtractionFilter on 2025-03-07T21:10:24Z (GMT).Extracted texttext/plain56652https://repositorio.unesp.br/bitstreams/4d38a00c-1b32-4c14-86ba-0db382cbf895/downloada2da255391e0503c689b8f128afc6585MD57falseAnonymousREADTHUMBNAILcarvalho_ls_me_sjc_int.pdf.jpgWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.PDFBoxThumbnail on 2025-03-07T21:10:23Z (GMT).Generated Thumbnailimage/jpeg2861https://repositorio.unesp.br/bitstreams/ad2ecaac-9748-4f48-a268-a879329e7daf/download94426b5338cc34c40e5946162013ff28MD56falseAnonymousREADcarvalho_ls_me_sjc_par.pdf.jpgWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.PDFBoxThumbnail on 2025-03-07T21:10:24Z (GMT).Generated Thumbnailimage/jpeg3174https://repositorio.unesp.br/bitstreams/5a40da91-4cbd-42cc-9ad9-5d3c9177594b/downloadac0d8ffe06004b91612e568a5b5ec5c1MD58falseAnonymousREADORIGINALcarvalho_ls_me_sjc_int.pdfDissertação Lara S. 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