Interação e atividade das NETs sobre o Vírus Sincicial Respiratório Humano (hRSV) em modelo in vitro

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Alves Junior, Ronaldo Silva [UNESP]
• Orientador(a): Toledo, Karina Alves de [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: hRSV; NETs; Imunidade inata; Antivirais; Proteases
• Palavras-chave em Inglês: Innate immunity; Antivirals
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11449/251217

O Vírus Sincicial Respiratório (hRSV) é o principal agente etiológico das infecções virais agudas do trato respiratório inferior, resultando em mais de 3 milhões de casos muito graves de bronquiolite todo o ano. Durante a infecção, os neutrófilos são massivamente recrutados ao local infeccioso, onde são estimulados a liberarem as NETs. Estas estruturas são compostas por DNA complexado a diferentes proteínas e enzimas. O hRSV é capaz de induzir a formação das NETs através da sua proteína F. Embora ainda não esteja claro qual seria o ligante das NETs para o RSV, estas estruturas apresentam ação virucida sobre o referido microrganismo. Neste trabalho, procuramos identificar um ligante das NETs para o hRSV, bem como, expandir o entendimento do impacto de diferentes proteases no curso da infecção in vitro para isolados clínicos e laboratoriais. Ensaios de Western blotting e imunoprecipitação apontaram interação do hRSV com uma banda de 50-75kDa presente nas NETs, identificada como mieloperoxidase (MPO) através de análises de sequenciamento de peptídeos e Western blotting. MPO purificada foi capaz de interagir com hRSV e o inibidor enzimático de MPO (PF-06281355) foi capaz de inibir sua ação virucida frente a isolados laboratoriais e clínicos do vírus. À exemplo de MPO, a atividade virucida de elastase e catepsina-G, bem como das NETs, foi estendida aos isolados clínicos. Os inibidores enzimáticos de todas as enzimas citadas acima bloquearam a ação virucida das enzimas e das NETs. Estes resultados, em conjunto com aqueles previamente descritos na literatura, demonstram que o efeito virucida das NETs se aplica a isolados laboratoriais e clínicos do hRSV, e que os mecanismos moleculares desta atividade envolvem a interação de hRSV com MPO, bem como a ação enzimática dela e de outras enzimas como elastase e catepsina G. O avanço dos estudos sobre a interação das NETs com o hRSV contribui para o entendimento dos efeitos benéficos ou deletérios das NETs no curso da infecção, possibilitando assim o desenvolvimento de novas estratégias que visem o bem estar e a qualidade de vida do paciente infectado.