Identificação de nucleases produzidas por fungos do complexo de espécies paracoccidioides spp.

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Yu, Kaio Shu Tsyr [UNESP]
• Orientador(a): Dias-Melicio, Luciane Alarcão [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Paracoccidioides; Paracoccidioidomicose; DNAse; NETs; Nuclease
• Palavras-chave em Inglês: Paracoccidioidomycosis
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/193679

A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica cujos agentes etiológicos são os fungos do complexo de espécies Paracoccidioides spp. As espécies conhecidas até o momento receberam os nomes de Paracoccidioides brasiliensis sensu stricto, Paracoccidioides americana sp. nov., Paracoccidioides restrepiensis sp. nov., Paracoccidioides venezuelensis sp. nov. e Paracoccidioides lutzii. Trata-se de uma doença endêmica da América Latina sendo distribuída de forma heterogênea entre os países como Brasil, Venezuela e Colômbia, sendo considerada uma doença negligenciada devido à falta de notificações, diagnósticos precisos e rápido, entre outros fatores, além também de atingir principalmente populações rurais em condições mais precárias. Recentemente, estudos moleculares evolutivos sugerem que esses fungos possuem diversos mecanismos de patogenicidade e sobrevivência intracelular indicando que dentro do gênero Paracoccidioides pode haver diferenças nos perfis metabólicos de seus representantes, e que essas diferenças desempenham um papel crucial na interação patógeno-hospedeiro. Assim, considerando o mecanismo de escape através da produção de moléculas como a DNAse, que já é descrito por diversos patógenos, e dois padrões diferentes de redes neutrofílicas extracelulares (NETs) encontrados em estudo conduzido com esses fungos, o objetivo deste trabalho foi investigar a presença de possíveis moléculas com ações de nucleases no metabolismo de diferentes cepas de Paracoccidioides spp. (Pb18, Pb265, Pb192, Pb339, Bt85 e P. lutzii). Dentre essas cepas, apenas o Pb18 e o P. lutzii foram capazes de induzir a formação de halo em um meio DNAse Test Agar, indicando que estas são capazes de liberar alguma molécula responsável pela degradação do DNA presente no meio. No ensaio de RT-qPCR, avaliamos a expressão dos genes PADG_11161 (NCBI Reference Sequence NW_011371358.1) e PADG_08285 (NCBI Reference Sequence NW_011371372.1) provenientes do genoma do P. brasiliensis, e PAAG_07101 (NCBI Reference Sequence XM_002790819.1) e PAAG_12429 (NCBI Reference Sequence XM_015847918.1) provenientes do genoma do P. lutzii. Assim, foi possível perceber um aumento da expressão desses genes ao longo dos tempos de incubação, principalmente nos ensaios com Pb18 e P. lutzii. Entretanto, não identificamos a presença direta de alguma proteína como a DNAse no ensaio de proteômica. Dessa forma, utilizamos os bancos de dados disponíveis para evidenciar algumas das proteínas hipotéticas presentes nas amostras analisadas e que poderiam ser interessantes em estudos futuros.