Expressão de desoxirribonucleases endógenas envolvidas na degradação das armadilhas extracelulares de neutrófilos em camundongos com sepse experimental

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Costa, Victor Ferreira
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Armadilhas extracelulares de neutrófilos; DNases; NETs; Neutrophil extracellular traps; Sepse; Sepsis
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17133/tde-08082022-091553/

Introdução: A sepse é uma condição clínica, caracterizada como disfunção inflamatória sistêmica em resposta a uma infecção, que pode levar a morte. As armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) são estruturas com formato de redes e compostas por proteínas de neutrófilos sobre um arcabouço de DNA. A depuração das NETs é mediada por desoxirribonucleases (DNases), que degradam esse arcabouço. Estudos realizados por nosso grupo de pesquisa demostram um aumento da concentração de NETs no plasma de pacientes com sepse. Além disso, diversos trabalhos mostram que a degradação de NETs por DNases recombinantes melhoram o desfecho de animais com sepse. Objetivo: Analisar a modulação da atividade DNase e a expressão dessas enzimas em animais saudáveis ou com modelo de sepse experimental. Metodologia: Utilizando o modelo de ligadura e punção do ceco (CLP) analisamos a mortalidade causada pelo modelo e os níveis de citocinas no plasma dos animais, além dos níveis de NETs e a atividade DNase no baço, fígado, circulação sistêmica e no lavado peritoneal. Também no baço, fígado, e no lavado peritoneal foi analisado a expressão dos genes para as DNases 1, X e γ. Além disso, verificamos em cultivo de células aderentes do baço se as NETs isoladas e o LPS podem interferir na liberação de DNases. Adicionalmente, utilizando o modelo de sepse induzida por injeção de LPS, verificamos a influência desta toxina na atividade e expressão de DNases no lavado peritoneal. Resultados: O modelo de sepse por CLP proporcionou a mortalidade de 100% dos animais em até 48h após o procedimento, também houve aumento dos níveis das citocinas TNF-α, IL-1β e IL-6 no plasma desses animais. Os níveis de NETs foram aumentados na circulação, baço, fígado e no lavado peritoneal dos animais com sepse. A atividade DNase dos animais com sepse aumentou no lavado e na circulação após o procedimento, enquanto no baço e fígado permaneceu estável. No baço, foi observado redução da expressão de todas as DNases analisadas, em contrapartida no fígado ocorreu aumento da expressão da DNase 1 e γ, no lavado peritoneal foi observado redução da expressão da DNase γ. Além disso, ambos os estímulos (LPS e NETs) diminuíram a secreção dessas enzimas em células aderentes do baço. Dessa forma, hipotetizamos que o aumento da atividade DNase observado no lavado dos animais sépticos induzidos por CLP, não correspondem as DNases endógenas. Então foi analisado através do modelo com injeção intraperitoneal de LPS, um aumento da atividade da DNase apenas no tempo de 12h após a sepse. Além disso neste modelo, a DNase 1 apresentou aumento de expressão em 12 horas e a DNase γ teve um aumento de expressão em 6 horas seguida por diminuição nos tempos posteriores. Conclusões: Nossos resultados mostram que em animais que passaram pela indução de sepse por CLP há um aumento da atividade Dnase no local da infecção, esse aumento parece ser dependente da presença de bactérias. Além disso, demonstramos que durante a sepse há modulação da expressão de DNases, que parece ser mediada pelo LPS.