Desenvolvimento e validação de controle de qualidade interno in house para quantificação de células progenitoras hematopoéticas CD34+/CD45+.

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Rocha, Francielle Ramalho [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Controle de Qualidade Interno; Célula progenitora hematopoética; Citometria de fluxo; Solução preservante; Internal quality control; Hematopoietic progenitor cell; Flow cytometry; Preservative solution
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/192307

O sistema de qualidade é de suma importância em laboratórios clínicos para avaliação de processos analíticos de maneira que os resultados liberados sejam verdadeiros. Para a metodologia de imunofenotipagem celular por citometria de fluxo as amostras devem ser frescas e os exames realizados preferencialmente dentro de 48 horas. É relevante utilizar amostras de controle de qualidade internos (CQI) padronizadas, de modo que possam ser repetidas rotineiramente, como referencial de qualidade. No Brasil, poucos serviços comercializam amostras preservadas para uso como CQI. Deste modo, a padronização in house com validação de processo para obtenção de amostras que possam ser utilizadas para esta finalidade é relevante. O objetivo deste trabalho foi desenvolver controle de qualidade interno para as rotinas de quantificação de células progenitoras hematopoéticas (CPH), utilizando solução preservante e avaliar a reprodutibilidade e estabilidade ao longo do tempo. Foram preparadas soluções preservantes contendo diferentes concentrações de anticoagulantes e fixadores, e destas, foi selecionada uma composição, originalmente padronizada neste estudo. Foram utilizados 5mL de sangue periférico, sendo este acrescido da solução a ser testada. Imediatamente, realizou-se a quantificação das populações de CPH em tubo Trucount®, usando anti-CD45, anti-CD34 e 7-AAD, conforme indicado pelo fabricante. A leitura foi realizada em citômetro de fluxo modelo FACSCalibur®-BD, para obtenção dos valores absolutos das CPH no dia zero, 7, 21, 35 e 49. Durante este período, as amostras foram mantidas refrigeradas (2 a 8ºC). Os valores obtidos no dia zero foram definidos como referencial e fixou-se o percentual de variação aceitável em ±40%, o mesmo aceito nos CQIs comerciais. Ao avaliar o desempenho das amostras preservadas durante o período preconizado, observou-se eficiente preservação celular, com distribuição estável e boa reprodutibilidade, tendo as variações limitadas ao intervalo preconizado. O produto gerado trata-se de uma solução preservante/conservante exclusiva, utilizada como CQI, passível de registro ou patente, validada para uso em imunofenotipagem de CPHs para fins de transplante autólogo, com desempenho semelhante ao de um controle de qualidade comercialmente disponível.