Produção, purificação e caracterização bioquímica funcional de uma α-L-arabinofuranosidase secretada pelo fungo Coriolopsis byrsina

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Nascimento, Carlos Eduardo de Oliveira
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: α-L-arabinofuranosidases; Agliconas terpénicas; Cultivo em estado sólido; Fungos; Microrganismos; Terpenic aglicone; Solid state contivatin; Fungi; Microorganisms
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/243467

As α-L-arabinofuranosidases podem ser produzidas por fungos, bactérias e plantas e são responsáveis pela clivagem de ligações glicosídicas α-1,2, α-1,3 e α-1,5 envolvendo arabinose. Nos últimos anos, muitos estudos têm demonstrado suas aplicações no processamento de sucos, visando diminuir a viscosidade e promoção da clarificação, e hidrólise de biomassa vegetal. Outro interesse por estas enzimas decorre de sua capacidade para melhorar a liberação de compostos aromatizantes presentes em bebidas como vinho, cerveja e sucos. Em vista das diferentes aplicações, o presente trabalho focou na prospecção de α-L-arabinofuranosidases dos fungos filamentosos Thermothelomyces heterothallica, Rasamsonia emersoni e Coriolopsis byrsina SXS16. Em seguida, conforme a capacidade de produção de α-L-arabinofuranosidases, foi purificada uma enzima secretada pelo fungo C. byrsina SXS16 e investigada suas propriedades bioquímicas funcionais. A enzima purificada, com massa molecular estimada em 55 kDa, exibiu máxima atividade a pH 3,5-4,0 e 50 ºC, e estabilidade em faixa de pH 3-8 a 4 °C por 24 horas, e temperatura de 10 a 60 ºC por 1 hora, cujas atividades remanescentes foram superiores a 70%. A enzima também se mostrou estável a etanol 5-10% após 24 horas de incubação a 28 °C, retendo atividade enzimática superior a 75% após incubação com etanol 5%, e para etanol 10%, superior a 60% de atividade. Ao avaliar a atividade enzimática sob a influência de íons metálicos, foi observado uma redução da catálise para para todos os íons, especialmente Fe3+ e Hg2+, cujas atividades enzimáticas residuais foram 25% e 33%, respectivamente. Em presença de D e L arabinose, a inibição enzimática foi notada apenas com L-arabinose, exibindo 50% de atividade residual a 0,2 mol L-1 e 30% a 0,9 mol L-1 deste açúcar. A enzima foi ativa sobre p-Nitrofenil-α-L-arabinofuranosideo (pNPA) e p-Nitrofenil-β-D-xilopiranosideo (pNPX), com 6,71 ± 0,23 e 0,38 ± 0,07 U mg-1, respectivamente, e para cinética enzimática com o substrato pNPA, notamos um KM de 3,45 ± 0,9 mmol L-1 e Vmax de 198,2 ± 24 μmol min-1 mg-1. A enzima também foi capaz de hidrolisar α-1,5-L-arabinana linear, mas nenhuma atividade foi notada sobre os substratos p-Nitrofenil-β-D-glucopiranosídeo e p-Nitrofenil-N-acetil-β-D-glicosaminídeo.