Comparação das linhagens monocíticas U937 e THP-1 como modelos de macrófago para estudos in vitro

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Nascimento, Camyla Rodrigues [UNESP]
• Orientador(a): Rossa Júnior, Carlos [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Ativação de macrófagos; Células THP-1; Células U937; Fenótipo
• Palavras-chave em Inglês: Macrophage activation; THP-1 Cells; U937 Cells; Phenotype.
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/217691

Macrófagos são células mielóides do sistema imune, caracterizados pela atividade fagocítica e capacidade de apresentar antígenos via MHC-II. Em sua maior parte, podem ter monócitos como precursores. São células altamente responsivas a sinais do microambiente, podendo assumir diferentes fenótipos em um espectro que varia de um perfil pró-inflamatório (ou ‘clássico’) denominado M1, até um perfil anti-inflamatório (ou ‘alternativo’), denominado M2. Macrófagos M1 podem ser polarizados por estímulos inflamatórios e microbianos como LPS e IFN-gama, resultando no aumento da produção de citocinas inflamatórias, maior atividade microbicida e produção de ROS. Macrófagos M2 também conhecidos como pró-reparo, apresentam maior atividade fagocítica e propriedades angiogênicas podendo ser diferenciados por IL-4, IL-10 e IL-13. Macrófagos tem um papel central na homeostase, patogênese e reparo, assim há grande interesse nestas células para o entendimento de processos biológicos relacionados à diversas doenças e processos de reparo, além de serem um importante alvo terapêutico potencial. THP-1 e U937 são as linhagens monocíticas humanas mais comumente utilizadas como precursores de macrófagos, porém podem apresentar diferenças importantes na resposta biológica, influenciando as informações obtidas. Este trabalho tem o objetivo de caracterizar a resposta biológica de macrófagos derivados das linhagens monocíticas THP-1 e U937, contribuindo para a seleção da melhor linhagem celular segundo a área de interesse em pesquisa. Diferentemente de monócitos primários, M-CSF não induziu a diferenciação em macrófagos, indicada pela adesão ao substrato de cultura in vitro e por alterações morfológicas, tanto da linhagem de THP-1 quanto U937, sendo necessário o estímulo com forbol-miristil-acetato (PMA). A partir dos resultados observou-se que a condição M1 leva ao aumento da expressão de TNF e IL-6 e redução da expressão de Arg1 e IL-10 determinados por RT-qPCR assim como maior produção de ROS avaliada por citometria de fluxo e aumento da secreção de IL-6 e IL-1β determinada por ELISA. Condições M2 induziram maior atividade fagocítica apenas para macrófagos derivados da linhagem THP-1. Os resultados indicam que há diferenças entre as linhagens THP-1 e U937 na resposta a estímulos externos, mas existem similaridades com a resposta biológica de macrófagos primários. Por fim, macrófagos derivados da linhagem THP-1 tendem a ter maior responsividade à estímulos M1 e a assumirem um fenótipo relacionado ao perfil pró-inflamatório/clássico, enquanto macrófagos derivados da linhagem U937 apresentam maior responsividade à estímulos M2 e desvio fenotípico para o perfil alternativo/de reparo.