Capacitação espermática in vitro de sêmen equino congelado: Efeitos da composição dos diluentes sobre eventos funcionais associados à fertilização

• Ano de defesa: 2026
• Autor(a) principal: Zutter, Bruna Merci de [UNESP]
• Orientador(a): Papa, Frederico Ozanam [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Criopreservação espermática; Capacitação espermática; Efluxo de colesterol; Seleção microfluídica; Reprodução equina; Reprodução animal; Preservação do sêmen; Fertilização in vitro
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11449/324740

A fertilização in vitro em equinos ainda apresenta limitações relacionadas à dificuldade de reproduzir, em ambiente controlado, os eventos fisiológicos da capacitação espermática, especialmente quando se utiliza sêmen criopreservado. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da composição lipídica dos diluentes de centrifugação e congelação sobre a viabilidade espermática, o efluxo de colesterol e a competência fecundante de espermatozoides equinos congelados. Para isso, foram conduzidos experimentos sequenciais avaliando parâmetros cinéticos, estruturais e funcionais. No Experimento I, avaliou-se a influência de diferentes diluentes de centrifugação (BotuSÊMEN®, BotuSÊMEN Special®, BotuSÊMEN KZ® e BotuSÊMEN Gold®) sobre os parâmetros cinemáticos espermáticos após incubação em meio capacitante. BotuSÊMEN KZ® e BotuSÊMEN Gold® apresentaram desempenho semelhante ao BotuSÊMEN®, com motilidade total de 51,37% e 53,26% e maiores valores de VCL (208,7 e 208,5 µm/s). No Experimento II, avaliou-se o efeito de diferentes diluentes de congelação (BotuCRIO®, G2, G3, G4 e G5) e do tempo de estabilização (20 min vs. 2 h) sobre a qualidade espermática pós-descongelação. BotuCRIO® e G4 apresentaram maior motilidade total (55,1% e 44,4%), enquanto G2 apresentou valores intermediários (42,7%), sem efeito do tempo de estabilização (P > 0,05). No Experimento III, investigou-se a combinação entre diluentes de centrifugação (BG e KZ) e de congelação (BC, G2, G2.1, G4 e G4.1), bem como o efeito da adição de leite desnatado. A combinação BG + BC apresentou os maiores valores de motilidade total (53,42%) e progressiva (26,00%), enquanto o leite reduziu esses parâmetros para 29,58–32,76%. No Experimento V, avaliou-se a dinâmica do efluxo de colesterol por citometria de fluxo. O efluxo ocorreu predominantemente nas primeiras horas, com redução da viabilidade de 75,3% para 53,3% em 9 horas (P < 0,001), sem influência dos diluentes (P > 0,05). No Experimento VI, avaliou-se a capacidade fecundante por fertilização in vitro, com taxas de clivagem de 17,4% (8/46) e blastocistos de 10,9% (5/46), com conversão de 62,5%. Conclui-se que a composição lipídica dos diluentes influencia a funcionalidade espermática e a competência fecundante, sendo a combinação entre BotuSÊMEN Gold® e G2 associada ao melhor equilíbrio entre estabilidade estrutural e responsividade funcional.