Produção da nucleoproteína recombinante do vírus da influenza aviária para aplicação no imunodiagnóstico

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2015
Autor(a) principal: Borzi, Mariana Monezi [UNESP]
Orientador(a): Montassier, Hélio José [UNESP]
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Ensaio de imunoadsorção enzimática
Imunodiagnostico
Nucleoproteinas
Gripe aviária
Virus
Avian influenza
Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/128008
http://www.athena.biblioteca.unesp.br/exlibris/bd/cathedra/17-09-2015/000849126.pdf
Resumo: A nucleoproteína (NP) do Vírus da Influenza Aviária (VIA) é um importante alvo antigênico no imunodiagnóstico desta doença, devido à sua baixa variabilidade entre as diferentes estirpes do VIA, resultando em uma elevada reatividade cruzada, e por ser também uma proteína altamente imunogênica para hospedeiros vertebrados. Neste estudo, o gene codificador da NP do VIA foi parcialmente clonado e expresso em Escherichia coli como uma proteína recombinante fusionada ao polipeptídeo SUMO e uma etiqueta de poli-histidina para seu uso no desenvolvimento de um ensaio de ELISA indireto para a detecção de anticorpos específicos contra o VIA. A NP recombinante foi expressada na fração solúvel e foi mais facilmente purificada. Após análise em relação aos seus principais sítios de antigenicidade e caracterização por meio de Western blotting, a NP recombinante foi utilizada como uma preparação antigênica no ELISA indireto para detecção de anticorpos contra o VIA presentes em amostras de soro de galinha. A análise comparativa do teste desenvolvido no presente estudo com um ELISA comercial apresentou valores de 95%, 97% e 96,7% de sensibilidade, especificidade e acurácia, respectivamente e um índice κappa de 0,88. Os resultados permitem concluir que a NP recombinante do VIA desenvolvida neste estudo possui características favoráveis para ser aplicada como antígeno no ELISA indireto, constituindo-se em um método sensível e específico para o imunodiagnóstico da Influenza Aviária em galinhas
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Neste estudo, o gene codificador da NP do VIA foi parcialmente clonado e expresso em Escherichia coli como uma proteína recombinante fusionada ao polipeptídeo SUMO e uma etiqueta de poli-histidina para seu uso no desenvolvimento de um ensaio de ELISA indireto para a detecção de anticorpos específicos contra o VIA. A NP recombinante foi expressada na fração solúvel e foi mais facilmente purificada. Após análise em relação aos seus principais sítios de antigenicidade e caracterização por meio de Western blotting, a NP recombinante foi utilizada como uma preparação antigênica no ELISA indireto para detecção de anticorpos contra o VIA presentes em amostras de soro de galinha. A análise comparativa do teste desenvolvido no presente estudo com um ELISA comercial apresentou valores de 95%, 97% e 96,7% de sensibilidade, especificidade e acurácia, respectivamente e um índice κappa de 0,88. Os resultados permitem concluir que a NP recombinante do VIA desenvolvida neste estudo possui características favoráveis para ser aplicada como antígeno no ELISA indireto, constituindo-se em um método sensível e específico para o imunodiagnóstico da Influenza Aviária em galinhasThe nucleoprotein (NP) of Avian Influenza Virus (AIV) is an important antigenic target for immunodiagnosis of this disease, due to its low variability among different AIV strains, resulting in high cross-reactivity, and the also highly immunogenic for vertebrate hosts. In this study, the gene enconding NP of AIV was cloned and expressed in Escherichia coli as a recombinant protein fused to SUMO polypeptide with a polyhistidine tag and used to develop an indirect ELISA for the detection of AIV-specific antibodies. The recombinant NP was expressed in the soluble fraction and easily purified. After Analysis of the main sites of antigenicity and characterization in Western-Blotting, the recombinant NP was optimized as an antigen preparation for indirect ELISA to detect anti-AIV antibodies in chicken serum samples. The comparative analysis of this ELISA with a commercial ELISA showed values of 95%, 97%, 96.7% of sensitivity, specificity and accuracy, respectively, and an agreement of k=0.88. In conclusion, the results indicated that the recombinant NP of AIV produced in this study is a good source of antigen for indirect ELISA and provides a sensitive and specific method for the immunodiagnosis of Avian Influenza in chickensxiv, 78 p. : il.porUniversidade Estadual Paulista (Unesp)Alephreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPEnsaio de imunoadsorção enzimáticaImunodiagnosticoNucleoproteinasGripe aviáriaVirusAvian influenzaProdução da nucleoproteína recombinante do vírus da influenza aviária para aplicação no imunodiagnósticoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessMicrobiologia Agropecuária - FCAVMicrobiologia AgropecuáriaBiologia, bioquímica e fisiologia de microorganismosUniversidade Estadual Paulista (UNESP), Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, JaboticabalPublication3d807254-e442-45e5-a80b-0f6bf3a26e48virtual::110615-13d807254-e442-45e5-a80b-0f6bf3a26e48virtual::110615-1f52717c7-8949-4a69-8619-285451b91282virtual::217296-1f52717c7-8949-4a69-8619-285451b91282virtual::217296-1ORIGINAL000849126.pdfapplication/pdf1214857https://repositorio.unesp.br/bitstreams/703360c1-51ad-4c1e-87a0-de8a1b19c34d/downloada2d47dd516d137071a1aa19d9f8af738MD51trueAnonymousREADTEXT000849126.pdf.txtWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.TikaTextExtractionFilter on 2023-12-07T06:14:50Z (GMT).Extracted texttext/plain102907https://repositorio.unesp.br/bitstreams/ad681bc6-f4c6-497b-bbe6-c878bc5902e8/download79b51b0e3223126b94b43d843b9a6208MD54falseAnonymousREADTHUMBNAIL000849126.pdf.jpgWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.ImageMagickPdfThumbnailFilter on 2016-11-11T04:33:42Z (GMT).IM Thumbnailimage/jpeg4483https://repositorio.unesp.br/bitstreams/03d4ecdf-41d9-4905-ad96-7c4e2d4892e0/downloadb57bb186df25e5709736b9186fb64178MD53falseAnonymousREAD11449/1280082026-04-15T05:24:48.270422Zopen.accessoai:repositorio.unesp.br:11449/128008https://repositorio.unesp.brRepositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestrepositoriounesp@unesp.bropendoar:29462026-04-15T05:24:48Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false
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