Efeitos de miR-BARTs do vírus de Epstein-Barr na modulação de vias de sinalização intracelular em células derivadas de linfomas humanos

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Caetano, Brunno Felipe Ramos [UNESP]
• Orientador(a): Oliveira, Deilson Elgui de [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: eng
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Vírus de Epstein-Barr; Linfoma de Burkitt; MicroRNAs virais; ebv-miR-BART7; ebv-miR-BART9; CRISPR/Cas9; Edição gênica; Epstein-Barr Virus
• Palavras-chave em Inglês: Burkitt lymphoma; Viral microRNAs; Genome editing
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/216332

O linfoma de Burkitt (LB) é um linfoma não-Hodgkin de células B altamente agressivo, associado à infecção pelo vírus de Epstein-Barr (EBV) em virtualmente todos os casos de forma endêmica da doença. O EBV foi o primeiro vírus humano descoberto codificar miRNAs no genoma viral, agrupados em duas regiões distintas: BamHI fragment H rightward open reading frame 1 (miR-BHRFs) e BamHI-A rightward transcripts (miR-BARTs). Embora extensivamente estudado no contexto de neoplasias epiteliais, o papel dos EBV miR-BARTs na patogênese de linfomas associados à infecção pelo EBV é essencialmente desconhecido. Este estudo tem como objetivo investigar os efeitos da supressão dos EBV miR-BART7 e miR-BART9 em células Akata EBV-positivas através da edição dirigida do genoma viral por CRISPR/Cas9. Ambos os mutantes gerados apresentaram baixos níveis de expressão dos miRNAs virais, demonstrando a eficácia da edição mediada por CRISPR/Cas9. A supressão de ambos miRNAs nos mutantes acarretou em uma diminuição drástica de viabilidade e proliferação celular, levando ao aumento da expressão de genes líticos virais. A análise do perfil protêomico dos mutantes demonstrou que a supressão do EBV miR-BART7 aumentou a expressão de diversas proteínas de ligação de RNA, enquanto a supressão de miR-BART9 levou ao aumento da expressão de DNA topoisomerases e proteínas associadas a via ubiquitina-proteossoma. Nossos resultados demonstram importantes papéis e mecanismos associados a expressão de EBV miR-BART7 e miR-BART9 no aumento da proliferação celular e manutenção da latência viral, sequestrando vias celulares importantes associadas ao ciclo lítico viral.