Desenvolvimento de metodologias rápidas para detecção de mecanismos de resistência bacteriana e determinação da suscetibilidade a antimicrobianos em Enterobacterales por MALDI-TOF MS

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Wilhelm, Camila Mörschbächer
• Orientador(a): Barth, Afonso Luis
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Farmacorresistência bacteriana; Espectrometria de massas por ionização e dessorção a laser assistida por matriz
• Palavras-chave em Inglês: Bacterial resistance; Susceptibility testing; MALDI-TOF MS; Enterobacterales
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/256644

Introdução: A demanda para a detecção rápida de mecanismos de resistência antimicrobiana e por métodos rápidos para a determinação da suscetibilidade aos antimicrobianos vem crescendo, especialmente devido ao aumento da prevalência de isolados de Enterobacterales produtores de carbapenemases KPC e/ou NDM. Com esta problemática em vista, a tecnologia de matrix-assisted laser desorption ionization – time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) vem se tornando uma opção de metodologia importante, pois permite o desenvolvimento de ensaios capazes de proverem um resultado rápido da presença de mecanismos de resistência e da suscetibilidade a antimicrobianos. Objetivo: Desenvolver metodologias rápidas para a detecção de mecanismos de resistência e para a determinação da suscetibilidade através da metodologia de MALDI-TOF MS. Métodos: Para a detecção de hidrólise por MALDI-TOF MS, as moléculas intactas de meropenem foram detectadas em um espectro de massa e relacionadas a um padrão interno de forma a calcular um índice quantitativo de hidrólise. Para a detecção da enzima KPC a partir de bactérias impregnadas em papel-filtro, uma suspensão bacteriana foi submetida a um protocolo de extração e posterior análise por MALDI-TOF MS, identificando o pico relativo à molécula intacta da enzima. Foi aplicada a metodologia MALDI Biotyper – antibiotic susceptibility test rapid assay (MBT-ASTRA), com simplificações, para a realização da avaliação da suscetibilidade a antimicrobianos a partir de colônias bacterianas, a partir de hemoculturas positivas e para a detecção de sinergismo. Resultados e conclusões: Um índice quantitativo para determinação da hidrólise ao meropenem foi desenvolvido, diferenciando Enterobacterales que possuíam os genes blaKPC ou blaNDM de isolados não produtores de carbapenemases. Foi possível identificar a enzima KPC de bactérias impregnadas em papel-filtro com alta especificidade, mas baixa sensibilidade. Foi possível desenvolver a técnica de MBT-ASTRA simplificada para determinação da suscetibilidade a meropenem a partir de colônia, para ceftazidima/avibactam e meropenem a partir de hemocultura e para a detecção de sinergismo da combinação de aztreonam e ceftazidima/avibactam.