Estudo da modulação gabaérgica na circuitaria envolvida na analgesia induzida pela estimulação elétrica do córtex insular.

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Matielo, Heloisa Alonso
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Córtex insular; Dor neuropática; Electrical stimulation; Estimulação elétrica; GABA Optogenética; GABA Optogenetics; Insular Cortex; Neuropathic Pain
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42138/tde-06012021-161326/

A dor neuropática apresenta-se como uma das condições mais difíceis ao tratamento antálgico, por ganhar um caráter crônico e implicar na qualidade de vida geral, o que faz necessário novos tratamentos eficazes. A neuroestimulação é capaz de alterar a atividade das vias modulatórias de dor, potencialmente promovendo analgesia. A Estimulação Elétrica do Córtex Insular (EECI) induz antinocicepção e influencia a atividade neuronal de áreas encefálicas, indicando a ínsula como alvo iminente para modulação da dor. Este trabalho teve por objetivo avaliar a participação da transmissão GABAérgica na antinocicepção promovida pela EECI repetitiva, avaliar alterações neuroplásticas e em células astrocitárias, bem como avaliar a presença de projeções excitatórias e inibitórias entre a ínsula e o córtex do cíngulo anterior (ACC) modulatórias de dor. Ratos machos, Sprague Dawley (280-340g; CEUA 3447131117), submetidos à constrição crônica do nervo isquiático direito (CCI) receberam um eletrodo concêntrico na ínsula posterior esquerda (1.0 mm caudal ao bregma, 5.8 mm de lateralidade, 7.1 mm de profundidade) e foram submetidos a cinco estimulações diárias, consecutivas (15 min, 60 Hz, 210 s, 1V). Metiodeto de bicuculina, antagonista de receptores GABAA, (0.1ug, i.t) administrado 1 h antes do teste de pressão de pata induziu reversão da antinocicepção induzida pela EECI, sem alterar a atividade geral no teste de campo aberto. Aumento de GAD65 na ínsula após EECI foi observado por imunofluorescência, sem alterações de GFAP, sinaptofisina e tirosina-hidroxilase (TH) na ínsula, hipocampo, cíngulo anterior e medial, Substância Cinzenta Periaquedutal (PAG) e Bulbo Rostral Ventromedial (RVM). A análise por western blotting não revelou alterações de GAD65 após EECI. Níveis de GABA, glutamato e glicina analisados por cromatografia líquida de alta performance (High Performance Liquid Chromatograph(- HPLC) não se alteraram após EECI. Em colaboração com a Universidade de Calgary, camundongos GAD2CrexAi9, PVCrexAi9, Vglut2CrexAi9 foram submetidos à lesão parcial do nervo isquiático esquerdo (Spared Nerve Injury- SNI) e à injeção de traçador toxina colérica- subunidade B (CTB488). Foi demonstrado a presença de projeções GABAérgicas, parvalbumina positivas (PV+) e glutamatérgicas entre a ínsula e o ACC, as quais não se apresentaram ativadas por c-Fos em ensaio de imunofluorescência. Camundongos GAD2Cre, PVCre, e Vglut2Cre receberam títulos com vetor viral para expressão de opsina (pAAV9-EF1a-DIO-hChR2(H134R)-eYFP) na ínsula direita e uma fibra óptica foi implantada na ínsula (0.5 mm posterior ao bregma, 0.375 de lateralidade, 4.0 mm de profundidade) ou ACC direito (1.055 mm anterior ao bregma, 0.255 mm de lateralidade, 1.522 mm de profundidade). Animais foram submetidos ao SNI e 6 a 8 semanas após a injeção do vírus, à optostimulação (lasers azuis DPSS 472 nm, 5mW, 10Hz ou 40Hz). A ativação optogenética de neurônios PV+ induziu preferência condicionada ao lugar, sem alterar o limiar mecânico no teste de sensibilidade mecânica (anestesiômetro digital plantar- Digital Plantar Anesthesiometer DPA). Os resultados salientam que a sinalização GABAérgica participa parcialmente da analgesia induzida pela EECI bem como demonstram a presença de projeções GABAérgicas, PV+ e glutamatérgicas entre a ínsula e o ACC, e sua influência sobre a modulação da dor em modelos de dor neuropática.