Identificação de potenciais fatores de retenção de mRNA da célula hospedeira ou da função Rev/RRE usando um novo vetor de HIV e bibliotecas lentivirais de CRISPR/Cas9

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Mesquita, Flávio da Silva
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Alternative splicing; Biblioteca de lentivírus; CRISPR/Cas9; Fatores de Retenção Nuclear; Genome-wide Screening; HIV-1; Lentiviral library; mRNA retention; Nuclear Retention Factors; Retenção de mRNA; Rev/RRE; Splicing Alternativo; Triagem Genômica
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-28052025-160034/

O vírus da imunodeficiência humana 1 (HIV-1) utiliza splicing alternativo para expressar todos os mRNAs necessários para a replicação. Durante a infecção por HIV-1, diversas proteínas são expressas e a ordem dos fatores, assim como a estequiometria, é regulada por um ajuste fino alcançada por processamento alternativo dos RNA mensageiros (mRNA). Três classes de mRNA são expressas pelo HIV-1. As proteínas regulatórias são expressas por mensagens completamente processadas, onde os íntrons do genoma viral são removidos; as proteínas regulatórias são expressas em RNA mensageiros contendo alguns íntrons, chamadas de parcialmente processadas; e as proteínas estruturais e não-estruturais são expressas por mensagens completamente não-processadas, contendo todos os íntrons. As mensagens completamente processadas são exportadas do núcleo de forma canônica, enquanto as outras mensagens, em teoria, seriam barradas por proteínas da membrana nuclear. Para superar essa retenção nuclear de forma que os RNA mensageiros que contêm íntrons sejam exportados para fora do núcleo, é necessária a proteína regulatória Rev do HIV-1. Proteína essa que se liga ao elemento responsivo ao Rev (RRE). Uma estrutura de RNA secundaria que, ligada a proteína Rev, consegue ultrapassar a barreira nuclear. No entanto, pouco se sabe sobre esse mecanismo. Aqui procuramos identificar os fatores de retenção nuclear que estão envolvidos na retenção de mRNA não-processadas do HIV-1 do núcleo celular. Para isso, utilizamos uma abordagem de triagem de todo o genoma humano com CRISPR/Cas9. O nocaute de alguns fatores deste complexo permitiu que o RNAs não-processados superassem a retenção nuclear na ausência de Rev. Esses resultados sugerem a possibilidade de uma nova abordagem no desenvolvimento de drogas contra o HIV-1 e a indução de latência.