As metaloproteinases de matriz como um possível alvo farmacológico para o tratamento da COVID-19

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2024
Autor(a) principal: Cavalcante, Gisele Lopes
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17133/tde-04042025-102236/
Resumo: Introdução: A COVID-19 é uma doença devastadora e a atividade desequilibrada das metaloproteinases da matriz (MMP) pode contribuir para sua fisiopatologia. Objetivo: Este estudo examinou se as concentrações elevadas de MMP-2 e MMP-9, e seus inibidores (TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3 e TIMP-4), persistem em pacientes 2 semanas após a recuperação da COVID-19 grave ou crítica, em comparação com indivíduos saudáveis. Também avaliou se a Doxiciclina (DOX) melhora o quadro clínico em animais infectados com SARS-CoV-2. Metodologia: Foram coletadas amostras de sangue de pacientes com COVID-19 grave, crítica e indivíduos saudáveis, 2 semanas após a recuperação. As concentrações de MMPs e TIMPs foram medidas utilizando ensaios Luminex®, e a atividade de MMP foi determinada por zimografia em gel. Em paralelo, usando um modelo animais, camundongos humanizados infectados com SARS-CoV-2 e tratados com DOX foram avaliados quanto à condição clínica, patologia pulmonar, níveis de citocinas, carga viral e lesões pulmonares. Resultados: Pacientes com COVID-19 grave ou crítica apresentaram aumento das concentrações de MMP-9 e MMP-2, com razões MMP-9/TIMP-1 e MMP-2/TIMP-2 elevadas, indicando maior atividade de MMP, confirmada por zimografia (p < 0,05). Concentrações mais altas de MMP-9 foram observadas em casos críticos versus graves (p < 0,05). MMP-9 e MMP-2 permaneceram elevadas após a recuperação, com níveis de MMP-9 associados à gravidade da doença. Camundongos tratados com DOXI por seis dias mostraram melhora clínica (p < 0,05), menor perda de peso (p < 0,05), redução da carga viral (p < 0,05), e, após dois dias de tratamento, redução de citocinas pró-inflamatórias. (IL-1B, IL-6, TNF-alfa). Além disso a DOXI nas concentrações de 50 e 100 &micro;M reduziu a carga viral e atenuou a liberação da citocina MCP-1 em células A549 ACE2+ infectadas com SARS-CoV-2. Conclusão: Essas mudanças sugerem que MMP-2 e MMP-9 são alvos farmacológicos importantes na COVID-19, e o tratamento com DOXI pode ser benéfico para a evolução clínica da doença.
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As concentrações de MMPs e TIMPs foram medidas utilizando ensaios Luminex®, e a atividade de MMP foi determinada por zimografia em gel. Em paralelo, usando um modelo animais, camundongos humanizados infectados com SARS-CoV-2 e tratados com DOX foram avaliados quanto à condição clínica, patologia pulmonar, níveis de citocinas, carga viral e lesões pulmonares. Resultados: Pacientes com COVID-19 grave ou crítica apresentaram aumento das concentrações de MMP-9 e MMP-2, com razões MMP-9/TIMP-1 e MMP-2/TIMP-2 elevadas, indicando maior atividade de MMP, confirmada por zimografia (p < 0,05). Concentrações mais altas de MMP-9 foram observadas em casos críticos versus graves (p < 0,05). MMP-9 e MMP-2 permaneceram elevadas após a recuperação, com níveis de MMP-9 associados à gravidade da doença. Camundongos tratados com DOXI por seis dias mostraram melhora clínica (p < 0,05), menor perda de peso (p < 0,05), redução da carga viral (p < 0,05), e, após dois dias de tratamento, redução de citocinas pró-inflamatórias. (IL-1B, IL-6, TNF-alfa). Além disso a DOXI nas concentrações de 50 e 100 &micro;M reduziu a carga viral e atenuou a liberação da citocina MCP-1 em células A549 ACE2+ infectadas com SARS-CoV-2. Conclusão: Essas mudanças sugerem que MMP-2 e MMP-9 são alvos farmacológicos importantes na COVID-19, e o tratamento com DOXI pode ser benéfico para a evolução clínica da doença.Introduction: COVID-19 is a devastating disease, and the imbalanced activity of matrix metalloproteinases (MMPs) may contribute to its pathophysiology. Objective: This study examined whether elevated concentrations of MMP-2 and MMP-9, and their inhibitors (TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3, and TIMP-4), persist in patients two weeks after recovery from severe or critical COVID-19, compared to healthy individuals. It also assessed whether doxycycline (DOX) improves the clinical condition in animals infected with SARS-CoV-2. Methodology: Blood samples were collected from patients with severe and critical COVID-19 and from healthy individuals two weeks post-recovery. MMP and TIMP concentrations were measured using Luminex® assays, and MMP activity was determined by gel zymography. In parallel, using an animal model, humanized mice infected with SARS-CoV-2 and treated with DOX were evaluated for clinical condition, lung pathology, cytokine levels, viral load, and lung lesions. Results: Patients with severe or critical COVID-19 showed increased concentrations of MMP-9 and MMP-2, with elevated MMP-9/TIMP-1 and MMP-2/TIMP-2 ratios, indicating higher MMP activity, confirmed by zymography (p < 0.05). Higher MMP-9 concentrations were observed in critical cases compared to severe cases (p < 0.05). MMP-9 and MMP-2 remained elevated post-recovery, with MMP-9 levels associated with disease severity. Mice treated with DOX for six days showed clinical improvement (p < 0.05), less weight loss (p < 0.05), reduced viral load (p < 0.05), and, after two days of treatment, reduced pro-inflammatory cytokines (IL-1B, IL-6, TNF-alpha). Additionally, DOX at concentrations of 50 and 100 &micro;M reduced viral load and attenuated MCP-1 cytokine release in A549 ACE2+ cells infected with SARS-CoV-2. Conclusion: These findings suggest that MMP-2 and MMP-9 are important pharmacological targets in COVID-19, and DOX treatment may be beneficial for the clinical progression of the disease.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPRodrigues, Fernando BellissimoSantos, Jose Eduardo Tanus dosCavalcante, Gisele Lopes2024-12-02info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17133/tde-04042025-102236/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2025-07-22T17:15:02Zoai:teses.usp.br:tde-04042025-102236Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212025-07-22T17:15:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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