<b>Caracterização dos Módulos Toxina-Antitoxina VapBC-2 e VapBC-4 de <i>Leptospira</i> interrogans sorovar Copenhageni.</b>

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Azevedo, Bruna Oliveira Pigatto
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertacoes da USP; Universidade de São Paulo; Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: VapBC; <i>Leptospira</i>; CRISPRi; Leptospirose; Toxina-Antitoxina; Toxin-Antitoxin; Leptospirosis
• Link de acesso: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-29042026-101647/

Os sistemas Toxina-Antitoxina (TA) são um dos mecanismos de adaptação bacteriana a condições adversas. A bactéria <i>L. interrogans</i> sorovar Copenhageni estirpe Fiocruz L1-130 contém nove sistemas TA putativos, destes, foram caracterizados experimentalmente e considerados funcionais os módulos VapBC-1, VapBC-3, sendo que neste estudo foi caracterizado o módulo VapBC-4 e parcialmente o módulo VapBC-2. No teste de cinética de crescimento em <i>E. coli</i>, a superexpressão da toxina VapC-2 resultou na inibição do crescimento, que foi recuperada pela coexpressão da antitoxina VapB-2, assim como ocorreu para VapC-4. Da mesma forma observada para o módulo VapBC-4, a capacidade de ligação da toxina e antitoxina foi demonstrada para o módulo VapBC-2 pelo ensaio <i>pull-down</i>, que indicou que a toxina VapC-2, e a antitoxina VapB-2 interagem <i>in vivo</i>. A interação <i>in vitro</i> entre a antitoxina e a toxina do módulo VapBC-4 foi confirmada pelo ensaio de Dot blot e ELISA. Além disso, confirmamos que a VapC-4 é uma endorribonuclease capaz de degradar o substrato MS2 viral e o RNA total de <i>L. interrogans</i>. Os estudos transcricionais por qPCR dos genes das toxinas <i>vapC-2</i> e <i>vapC-4</i> parecem sugerir que estes módulos estejam envolvidos na adaptabilidade da <i>L. interrogans</i> a condições ambientais adversas, o que pode implicar no comportamento da bactéria dentro do hospedeiro e, possivelmente, na virulência. O silenciamento do módulo VapBC-4 de <i>L. interrogans</i> realizado pela ferramenta CRISPRi, foi usado para o estudo do fenótipo e do papel deste módulo TA na bactéria. Interessantemente, no teste de desafio em hamsters, o grupo mutante teria tido um aumento da virulência, observado pelo aumento da mortalidade e maior perda de peso, em relação ao grupo controle. Em conclusão, o módulo VapBC-2 necessita de mais estudos para ser caracterizado, enquanto os resultados sugerem que o módulo VapBC-4 é funcional e considerado <i>bona fide</i>.