Substituição do soro fetal bovino em meio de maturação oocitária visando melhora da congelação de embriões bovinos produzidos in vitro

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Pazianoto, Luiz Felipe Fachin
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Acúmulo lipídico; Blastocisto; Blastocyst; Direct transfer; In vitro embryo production; Lipid accumulation; Produção in vitro de embriões; Transferência direta
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-21032025-111803/

A congelação de embriões, aliada a produção in vitro de embriões (PIVE), é uma ferramenta importante para disseminação de genética de alto valor na bovinocultura. Entretanto, esta ferramenta poderia ser ainda mais disseminada com a melhoria dos resultados de prenhez com uso do método de transferência direta (DT do inglês direct transfer). Os resultados inconsistentes da DT podem ter influência da adição de soro fetal bovino (SFB) durante a maturação oocitária, visto que influencia a composição lipídica dos blastocistos gerados na PIVE. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar e comparar os benefícios da substituição do SFB por outra fonte de lipídeos durante a maturação in vitro (MIV). A hipótese do trabalho foi que a adição de fase apolar ou polar do SFB em substituição ao SFB integral durante a MIV melhoraria a sobrevivência embrionária pós-criopreservação. O delineamento experimental foi realizado com 3 grupos experimentais: complexos cúmulos-oócito (COCs) grau 1 foram maturados in vitro com suplementação de 10% de SFB como grupo controle, 10% da adição da fração apolar ou 10% da fração polar. Os COCs foram fertilizados in vitro e os possíveis zigotos foram cultivados em meio livre da adição de SFB por sete dias. As taxas de clivagem e blastocistos foram avaliadas após 96 e 168 horas de cultivo, respectivamente e observou-se que não houve diferença estatística entre os grupos com relação a ambas as taxas. Alguns blastocistos foram fixados para contagem de células da massa celular interna (MCI) e do trofectoderma (TE). Os demais blastocistos foram então submetidos ao congelamento lento com etilenoglicol. Após o descongelamento e cultivo por 24h, não houve diferença significativa entre os grupos na sobrevivência embrionária avaliada pela re-expansão da blastocele. Foi realizado o teste de integridade de membrana celular através da coloração diferencial, que apresentou uma diminuição no número total de células íntegras dos grupos apolar e polar em relação ao controle, entretanto não houve diferença quanto ao número de células lesadas nem quanto à proporção de células lesadas sobre as íntegras. O teste de integridade da membrana epitelial do trofectoderma indicou que não houve diferença entre os grupos. Ainda à incidência de apoptose foi avaliada por quantificação de caspase ativa, que apresentou-se reduzida no grupo Apolar em relação aos outros dois grupos. Embriões descongelados foram também fixados e tiveram as células da MCI e TE contadas por imunofluorescência e não houve diferenças estatísticas entre os grupos, antes ou depois do congelamento. Em conclusão, a adição das fases polar ou apolar na MIV não melhorou a sobrevivência embrionária pós- congelação, entretanto o teste da caspase ativa nos indica que são necessários mais estudos para investigar se a relação de menor apoptose tem influência significativa na sobrevida do embrião após sua transferência na receptora.