Efeitos do preenchedor de plasma gel na viabilidade, proliferação e migração de fibroblastos de derme humana in vitro
| Ano de defesa: | 2024 |
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| Tipo de documento: | Dissertação |
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Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
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| Programa de Pós-Graduação: |
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| Palavras-chave em Português: | |
| Link de acesso: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25149/tde-22012025-100254/ |
Resumo: | Introdução: Os concentrados plaquetários têm sido cada vez mais utilizados na estética facial tanto para mesoterapia, bioestímulo de colágeno, bem como um preenchedor autólogo. Para obtenção desses concentrados, existem diversos protocolos de centrifugação e ativação plaquetária visando obter o melhor produto possível. Porém essa diversidade de protocolos causa dúvidas no profissional de estética facial sobre quais parâmetros utilizar. Objetivos: Neste estudo buscamos padronizar o melhor protocolo de preparação do plasma gel, baseado na viabilidade, morfologia e migração de fibroblastos de derme humana em cultura de células, após o tratamento com esses géis de plasma preparados por meio de quatro diferentes protocolos. Este estudo é pioneiro em testar o conceito de centrifugação em baixa velocidade (LSCC) no preenchedor de plasma gel e buscar uma padronização de protocolo de centrifugação para o profissional da estética facial, com embasamento científico. Materiais e métodos: As células foram cultivadas em meio de cultura com 20% de gel de plasma derivados de quatro diferentes protocolos e um grupo controle (células e meio de cultura - Grupo C), sendo: Grupo 1 - centrifugação a 580 g por 8 min em tubo contendo anticoagulante (AC) e ativação com CaCl2 (G1); Grupo - centrifugação a 580 g por 8 min em tubo contendo AC sem ativação (G2); Grupo 3 - centrifugação a 210 g por 8 min em tubo sem AC e ativação com CaCl2 (G3) e Grupo 4 - centrifugação a 210 g por 8 min em tubo sem AC sem ativação (G4).. Foram realizados os seguintes ensaios: teste de viabilidade com MTT (3-(4,5 dimetiltiazol 2 il) -5- (3-carboximetoxifenil) -2- (4-sulfofenil) 2H tetrazólio) e cristal violeta; análise qualitativa de células em cultura através de coloração com Hematoxilina-Eosina (HE) e ensaio de cicatrização/fechamento de fenda por análise de migração celular. Resultados e discussão: Nos G3 e G4 os fibroblastos apresentaram proliferação, viabilidade e migração significativamente maiores em relação ao grupo controle após 72 h. Os G1 e G2 apresentaram acúmulo de fibrina, com um número reduzido de células na coloração com HE. Em adição, no ensaio de cicatrização/fechamento de fenda, o G2 teve um fechamento mais lento, semelhante ao grupo controle, com presença de fibrina nos G1 e G2 após 72hs. Conclusão: O plasma gel é um preenchedor biocompatível e a redução da força de centrifugação (RCF) e o uso de tubos de coleta de sangue sem anticoagulante melhoram sua qualidade, tornando-o ainda mais biocompativel, aumentando a viabilidade dos fibroblastos de derme humana. Dessa forma o protocolo de centrifugação a 208g de mostrou mais favorável, confirmando o conceito de centrifugação em baixa velocidade. |
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Efeitos do preenchedor de plasma gel na viabilidade, proliferação e migração de fibroblastos de derme humana in vitroEffects of plasma gel filler in viability, proliferation and migration of dermal human fibroblasts in vitrocolágenocollagenfibrina rica em plaquetasfibroblastosfibroblastsplasma gel fillerplasma gel preenchedorplasma rico em plaquetasplatelet rich fibrinplatelet rich plasmaIntrodução: Os concentrados plaquetários têm sido cada vez mais utilizados na estética facial tanto para mesoterapia, bioestímulo de colágeno, bem como um preenchedor autólogo. Para obtenção desses concentrados, existem diversos protocolos de centrifugação e ativação plaquetária visando obter o melhor produto possível. Porém essa diversidade de protocolos causa dúvidas no profissional de estética facial sobre quais parâmetros utilizar. Objetivos: Neste estudo buscamos padronizar o melhor protocolo de preparação do plasma gel, baseado na viabilidade, morfologia e migração de fibroblastos de derme humana em cultura de células, após o tratamento com esses géis de plasma preparados por meio de quatro diferentes protocolos. Este estudo é pioneiro em testar o conceito de centrifugação em baixa velocidade (LSCC) no preenchedor de plasma gel e buscar uma padronização de protocolo de centrifugação para o profissional da estética facial, com embasamento científico. Materiais e métodos: As células foram cultivadas em meio de cultura com 20% de gel de plasma derivados de quatro diferentes protocolos e um grupo controle (células e meio de cultura - Grupo C), sendo: Grupo 1 - centrifugação a 580 g por 8 min em tubo contendo anticoagulante (AC) e ativação com CaCl2 (G1); Grupo - centrifugação a 580 g por 8 min em tubo contendo AC sem ativação (G2); Grupo 3 - centrifugação a 210 g por 8 min em tubo sem AC e ativação com CaCl2 (G3) e Grupo 4 - centrifugação a 210 g por 8 min em tubo sem AC sem ativação (G4).. Foram realizados os seguintes ensaios: teste de viabilidade com MTT (3-(4,5 dimetiltiazol 2 il) -5- (3-carboximetoxifenil) -2- (4-sulfofenil) 2H tetrazólio) e cristal violeta; análise qualitativa de células em cultura através de coloração com Hematoxilina-Eosina (HE) e ensaio de cicatrização/fechamento de fenda por análise de migração celular. Resultados e discussão: Nos G3 e G4 os fibroblastos apresentaram proliferação, viabilidade e migração significativamente maiores em relação ao grupo controle após 72 h. Os G1 e G2 apresentaram acúmulo de fibrina, com um número reduzido de células na coloração com HE. Em adição, no ensaio de cicatrização/fechamento de fenda, o G2 teve um fechamento mais lento, semelhante ao grupo controle, com presença de fibrina nos G1 e G2 após 72hs. Conclusão: O plasma gel é um preenchedor biocompatível e a redução da força de centrifugação (RCF) e o uso de tubos de coleta de sangue sem anticoagulante melhoram sua qualidade, tornando-o ainda mais biocompativel, aumentando a viabilidade dos fibroblastos de derme humana. Dessa forma o protocolo de centrifugação a 208g de mostrou mais favorável, confirmando o conceito de centrifugação em baixa velocidade.Background: Platelet concentrates have been increasingly used in facial aesthetics. To obtain these products, there are several centrifugation and activation protocols in order to obtain the best products. However, this diversity of protocols leaves the facial aesthetics professional confused about which parameters to use. Objective: In this study we seek to standardize the best plasma gel preparation protocol, evaluating the proliferation, viability, morphology and migration of fibroblasts in cell culture, after treatment with plasma gels prepared by four different protocols. This study is pioneer in testing the Low Speed Centrifugation Concept (LSCC) in plasma gel filler, searching for a standardization of centrifugation protocol for facial aesthetics professionals with a scientific basis. Materials and methods: The cells were cultivated in culture medium with 20% plasma gel derived from four different protocols and a control group (cells and culture medium - Group C) being: Group 1- centrifugation at 580 g for 8 min in a tube with anticoagulant (AC) and activation with CaCl2 (G1); Group 2 - centrifugation at 580 g for 8 min in a tube containing AC without activation (G2); Group 3 - centrifugation at 210 g for 8 min in a tube without AC and activation with CaCl2 (G3) and Group 4 - centrifugation at 210 g for 8 min in a tube without AC without activation. The following tests were performed: MTT (3-(4,5 dimethylthiazole 2 il) -5- (3-carboxymethoxyphenyl) -2- (4-sulfophenyl) 2H tetrazolium) and crystal violet (viability tests); qualitative analysis of cells in culture using Hematoxylin-Eosin (HE) staining and wound healing/closure assay using cell migration analysis. Results: In G3 and G4 fibroblasts presented significantly higher proliferation and viability in relation to the control group after 72 h. G1 presented a high amount of fibrin, with a reduced cell number in the HE staining. In addition, in the wound healing/cleft closure assay, G2 had a slower closure, similar to the control group, with presence of fibrin in G1 and G2 after 72 hours. Conclusion: Plasma gel is a biocompatible filler and the reduction of the centrifugal force (RCF) and use of tubes without AC for blood collection improve the quality of the product, making it even more biocompatible, increasing the viability of human dermal fibroblasts. Therefore, the centrifugation protocol at 208g was more favorable, confirming low speed centrifugation concept.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPBuzalaf, Marilia Afonso RabeloSlompo, Camila2024-09-27info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25149/tde-22012025-100254/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPReter o conteúdo por motivos de patente, publicação e/ou direitos autoriais.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2025-01-23T14:09:02Zoai:teses.usp.br:tde-22012025-100254Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212025-01-23T14:09:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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Introdução: Os concentrados plaquetários têm sido cada vez mais utilizados na estética facial tanto para mesoterapia, bioestímulo de colágeno, bem como um preenchedor autólogo. Para obtenção desses concentrados, existem diversos protocolos de centrifugação e ativação plaquetária visando obter o melhor produto possível. Porém essa diversidade de protocolos causa dúvidas no profissional de estética facial sobre quais parâmetros utilizar. Objetivos: Neste estudo buscamos padronizar o melhor protocolo de preparação do plasma gel, baseado na viabilidade, morfologia e migração de fibroblastos de derme humana em cultura de células, após o tratamento com esses géis de plasma preparados por meio de quatro diferentes protocolos. Este estudo é pioneiro em testar o conceito de centrifugação em baixa velocidade (LSCC) no preenchedor de plasma gel e buscar uma padronização de protocolo de centrifugação para o profissional da estética facial, com embasamento científico. Materiais e métodos: As células foram cultivadas em meio de cultura com 20% de gel de plasma derivados de quatro diferentes protocolos e um grupo controle (células e meio de cultura - Grupo C), sendo: Grupo 1 - centrifugação a 580 g por 8 min em tubo contendo anticoagulante (AC) e ativação com CaCl2 (G1); Grupo - centrifugação a 580 g por 8 min em tubo contendo AC sem ativação (G2); Grupo 3 - centrifugação a 210 g por 8 min em tubo sem AC e ativação com CaCl2 (G3) e Grupo 4 - centrifugação a 210 g por 8 min em tubo sem AC sem ativação (G4).. Foram realizados os seguintes ensaios: teste de viabilidade com MTT (3-(4,5 dimetiltiazol 2 il) -5- (3-carboximetoxifenil) -2- (4-sulfofenil) 2H tetrazólio) e cristal violeta; análise qualitativa de células em cultura através de coloração com Hematoxilina-Eosina (HE) e ensaio de cicatrização/fechamento de fenda por análise de migração celular. Resultados e discussão: Nos G3 e G4 os fibroblastos apresentaram proliferação, viabilidade e migração significativamente maiores em relação ao grupo controle após 72 h. Os G1 e G2 apresentaram acúmulo de fibrina, com um número reduzido de células na coloração com HE. Em adição, no ensaio de cicatrização/fechamento de fenda, o G2 teve um fechamento mais lento, semelhante ao grupo controle, com presença de fibrina nos G1 e G2 após 72hs. Conclusão: O plasma gel é um preenchedor biocompatível e a redução da força de centrifugação (RCF) e o uso de tubos de coleta de sangue sem anticoagulante melhoram sua qualidade, tornando-o ainda mais biocompativel, aumentando a viabilidade dos fibroblastos de derme humana. Dessa forma o protocolo de centrifugação a 208g de mostrou mais favorável, confirmando o conceito de centrifugação em baixa velocidade. |
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