Proteínas de leptospiras reconhecidas durante a resposta imunológica humoral na leptospirose humana

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Nogueira, Gabriela de Souza
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Antígenos; Antigens; Leptospira ssp; Leptospiral; Leptospirose; Leptospirosis; Proteínas; Proteins; SDS-PAGE; Serological tests; Testes sorológicos
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5134/tde-02082023-153637/

A leptospirose é uma zoonose bacteriana causada por leptospiras, com surtos sazonais, principalmente em países tropicais e subtropicais. Apresenta sintomas inespecíficos dificultando o diagnóstico clínico e, portanto, o diagnóstico laboratorial da leptospirose é importante para a confirmação dos casos suspeitos e para o monitoramento da doença. As leptospiras apresentam uma vasta variedade antigênica com inúmeras proteínas em sua membrana externa. O conhecimento da resposta imunológica de pacientes com leptospirose contra essas proteínas será importante para auxiliar no desenvolvimento de metodologias para o diagnóstico e para utilização em vacinas humanas. Dessa forma, o objetivo do trabalho foi avaliar o perfil antigênico de 20 sorovares de leptospiras através da técnica de SDS-PAGE e avaliar a reatividade sorológica de amostras de soro de pacientes portadores de leptospirose através da metodologia de Immunoblotting frente a cepas patogênicas e saprófitas de leptospiras. Foram utilizados 20 sorovares de leptospiras e 19 soros reagentes de pacientes com leptospirose confirmados pelo teste de aglutinação microscópica (MAT) para cada um dos sorovares exceto sorovar Pomona. Foram utilizados também quatro soros provenientes de casos de óbitos com títulos de 100 no MAT contra os sorovares Panama e Castellonis. Como controle negativo, foi utilizado 1 soro com resultado reagente para dengue e negativo para leptospirose. Através da técnica de SDS-PAGE, foi demonstrado que as frações antigênicas dos sorovares se concentraram, em sua maioria, em massa molecular entre 37-50 kDa. Também foi possível a visualização de frações entre 50-75 kDa. O \"Immunoblotting foi realizado com anticorpos anti-IgM humanos e os óbitos também com anti-IgG. O resultado da reatividade entre soros e antígenos possibilitou uma visualização de frações proteicas que variaram, em média, entre 10-15 kDa. Um caso de óbito apresentou reatividade com o sorovar Panama ao utilizar anti-IgG. Para cada antígeno de sorovar foi utilizado um soro reagente específico para esse antígeno e foi possível verificar reatividade em todos. Na membrana do antígeno de sorovar Djasiman, o soro reagente para sorovar Cynopteri apresentou reatividade com frações proteicas de massa molecular entre 50-75 kDa. Na membrana do antígeno de sorovar Patoc, o soro reagente para sorovar Tarassovi apresentou reatividade com frações proteicas de massa molecular acima de 100 kDa. Nas membranas com antígeno dos sorovares Icterohaemorrhagiae e Copenhageni, o soro reagente para sorovar Tarassovi também apresentou reatividade com massa molecular entre 35-50 kDa. Os soros reagentes para os sorovares Sejroe, Hardjo e Wolffi, foram os que apresentaram maior reatividade entre todas as membranas dos antígenos, sendo possível visualizar mais de uma fração por massa molecular. Os resultados obtidos poderão contribuir para o desenvolvimento de testes para o diagnóstico sorológico da leptospirose humana e na produção de vacinas humanas, com um estudo mais aprofundado das proteínas