Análise da localização de FMRP no fuso mitótico e centrossomo de células HEK293T

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Araujo, Natalia de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Cell cycle; Centrosome; Centrossomo; Ciclo celular; FMRP; Fuso mitótico; Mitotic spindle
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-23102025-181754/

O gene FMR1 codifica para a proteína FMRP, cuja deficiência ou ausência de expressão está diretamente associada à síndrome do X frágil (FXS), principal causa de deficiência intelectual hereditária em homens. Embora a FMRP seja altamente expressa em neurônios, onde atua como reguladora traducional no controle sináptico, tem expressão ubíqua, detectada em células-tronco e progenitoras neuro-gliais, nas quais foi associada a processos de proliferação e diferenciação celular durante o neurodesenvolvimento. Estudos em Drosophila melanogaster demonstraram que a ausência do ortólogo dFmr1 resulta em fusos mitóticos aberrantes, divisões assíncronas e falhas na citocinese. Contudo, a possível localização da FMRP no fuso mitótico e no centrossomo ainda não foi explorada. Precipitação por afinidade de FMRP seguida de espectrometria de massas, realizada pelo nosso grupo de pesquisa, associou a FMRP a 12 proteínas do prosencéfalo de ratos em P12, classificadas como componentes do fuso mitótico, segundo análise de ontologia gênica (GO). Com base nesses achados, definiu-se para esse trabalho o objetivo geral de determinar a localização de FMRP à mitose de células HEK293T e especificamente se ela se distribui ao fuso mitótico e centrossomos. A linhagem celular HEK293T foi selecionada para o estudo, por ter elevada expressão de FMRP e expressar RNAm em congruência com alvos ribonucleicos regulados por essa proteína no encéfalo. Foi testado e padronizado um protocolo de sincronização de células HEK293T em fases do ciclo celular e desenvolvida uma pipeline de análise quantitativa de colocalização proteica por imunofluorescência indireta. Nossos resultados refutaram a hipótese de que FMRP se localiza no fuso mitótico ou no centrossomo de células HEK293T. É possível que FMRP se relacione com proteínas do fuso mitótico em outras fases do ciclo celular, em células ou espécies específicas ou ainda apresente interação indireta com essas moléculas, em outro contexto biológico.