Doxiciclina na piscicultura: estudo de incorporação do fármaco na ração e estimativa do período de carência em tilápias

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2024
Autor(a) principal: Damaceno, Marina Alves
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-05122024-173401/
Resumo: No contexto complexo da interação entre animais, seres humanos e ecossistemas, a abordagem \"One Health\" destaca-se como fundamental, promovendo a colaboração entre setores públicos, saúde animal, medicina humana, veterinária, organizações ambientais e pesquisa. Na piscicultura, onde o uso restrito de antimicrobianos enfrenta desafios legais, aumentando a propensão ao uso irregular e ameaçando a segurança alimentar e a economia, a precisão dos métodos analíticos para detectar resíduos em níveis mínimos torna-se crucial. Nesse cenário, desenvolveu-se e validou-se um procedimento inovador para o preparo de amostras destinadas à análise de resíduos de doxiciclina em carne de peixe. Este procedimento mostrou-se não apenas eficaz para a substância em questão, mas também demonstrou ser aplicável e eficiente na detecção de resíduos de oxitetraciclina, fornecendo resultados igualmente satisfatórios. A metodologia desenvolvida destacou-se pela sua linearidade (r>0,99) e por apresentar uma sensibilidade notavelmente alta, tanto para a doxiciclina, com um limite de quantificação de 2,0 &mu;g kg&sup-1;, quanto para a oxitetraciclina, cujo limite de quantificação foi de 10 &mu;g kg&sup-1;. Os métodos desenvolvidos apresentaram linearidade adequada (r>0,99), além de boa repetibilidade e precisão intermediária (CV<8,93%) e adequada exatidão, expressa na forma de fator de recuperação (>98%<104%), visando avaliar o perfil de depleção residual desses agentes após a administração oral em peixes, provenientes de um estudo experimental. O preparo de amostra envolveu a utilização do procedimento de extração líquido-sólido associado à microextração líquido-líquido dispersiva com modificações inovadoras, e um sistema analítico LC-MS/MS. Dada a administração predominantemente oral dos fármacos aos animais, através da ração, a correta dosagem do tratamento e a segurança ambiental são considerações fundamentais. Desse modo, métodos de incorporação dos fármacos foram desenvolvidos e validados com adequada seletividade, linearidade (r>0,99), repetibilidade e precisão intermediária (CV<3,38%); exatidão, expressa na forma de fator de recuperação (>97%<103%), eficiência de incorporação do fármaco (59-72%), adequada homogeneidade (CV<6%) e baixa lixiviação (<5,1%) dos ativos quando a ração permaneceu em contato com a água por até 15 minutos. O LC-MS/MS foi configurado com interface eletrospray operando em modo positivo, e fase móvel composta por água e metanol contendo 0,5% de ácido fórmico em modo isocratico. O estudo de depleção foi conduzido em peixes da espécie tilápia, envolvendo um tratamento com a ração medicada na dose oral diária de 50 mg (kg PV&sup-1;) para DOX e 80 mg (kg PV&sup-1;) para OTC, ambos por 5 dias consecutivos. A temperatura média da água foi mantida em 30°C, e o período de carência mínimo estimado foi de 4 dias (ou 120 Graus-dia) para a eliminação dos resíduos de DOX e de 3 dias para OTC (ou 90 Graus-dia), atingindo níveis abaixo das concentrações consideradas seguras para essas substâncias, com base nos LMRs estabelecidos (100 ng g-1 para DOX e 200 ng-1 para OTC), com 95% de confiança e considerando o limite de tolerância de 99%.
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Nesse cenário, desenvolveu-se e validou-se um procedimento inovador para o preparo de amostras destinadas à análise de resíduos de doxiciclina em carne de peixe. Este procedimento mostrou-se não apenas eficaz para a substância em questão, mas também demonstrou ser aplicável e eficiente na detecção de resíduos de oxitetraciclina, fornecendo resultados igualmente satisfatórios. A metodologia desenvolvida destacou-se pela sua linearidade (r>0,99) e por apresentar uma sensibilidade notavelmente alta, tanto para a doxiciclina, com um limite de quantificação de 2,0 &mu;g kg&sup-1;, quanto para a oxitetraciclina, cujo limite de quantificação foi de 10 &mu;g kg&sup-1;. Os métodos desenvolvidos apresentaram linearidade adequada (r>0,99), além de boa repetibilidade e precisão intermediária (CV<8,93%) e adequada exatidão, expressa na forma de fator de recuperação (>98%<104%), visando avaliar o perfil de depleção residual desses agentes após a administração oral em peixes, provenientes de um estudo experimental. O preparo de amostra envolveu a utilização do procedimento de extração líquido-sólido associado à microextração líquido-líquido dispersiva com modificações inovadoras, e um sistema analítico LC-MS/MS. Dada a administração predominantemente oral dos fármacos aos animais, através da ração, a correta dosagem do tratamento e a segurança ambiental são considerações fundamentais. Desse modo, métodos de incorporação dos fármacos foram desenvolvidos e validados com adequada seletividade, linearidade (r>0,99), repetibilidade e precisão intermediária (CV<3,38%); exatidão, expressa na forma de fator de recuperação (>97%<103%), eficiência de incorporação do fármaco (59-72%), adequada homogeneidade (CV<6%) e baixa lixiviação (<5,1%) dos ativos quando a ração permaneceu em contato com a água por até 15 minutos. O LC-MS/MS foi configurado com interface eletrospray operando em modo positivo, e fase móvel composta por água e metanol contendo 0,5% de ácido fórmico em modo isocratico. O estudo de depleção foi conduzido em peixes da espécie tilápia, envolvendo um tratamento com a ração medicada na dose oral diária de 50 mg (kg PV&sup-1;) para DOX e 80 mg (kg PV&sup-1;) para OTC, ambos por 5 dias consecutivos. A temperatura média da água foi mantida em 30°C, e o período de carência mínimo estimado foi de 4 dias (ou 120 Graus-dia) para a eliminação dos resíduos de DOX e de 3 dias para OTC (ou 90 Graus-dia), atingindo níveis abaixo das concentrações consideradas seguras para essas substâncias, com base nos LMRs estabelecidos (100 ng g-1 para DOX e 200 ng-1 para OTC), com 95% de confiança e considerando o limite de tolerância de 99%.In the complex context of the interaction between animals, humans, and ecosystems, the \'One Health\' approach stands out as fundamental, promoting collaboration between public sectors, animal health, human medicine, veterinary, environmental organizations, and research. In fish farming, where the restricted use of antimicrobials faces legal challenges, increasing the propensity for irregular use and threatening food safety and the economy, the precision of analytical methods to detect residues at minimal levels becomes crucial. In this scenario, a novel procedure for the preparation of samples for the analysis of doxycycline residues in fish meat was developed and validated. This procedure proved not only effective for the substance in question but also applicable and efficient in detecting oxitetracycline residues, providing equally satisfactory results. The developed methodology stood out for its linearity (r>0.99) and for presenting remarkably high sensitivity, both for doxycycline, with a quantification limit of 2.0 &mu; g kg&sup-1;, and for oxitetracycline, whose quantification limit was 10 &mu; g kg&sup-1;. The developed methods showed adequate linearity (r>0.99), as well as good repeatability and intermediate precision (CV<8.93%) and adequate accuracy, expressed as recovery factor (>98%<104%), aiming to evaluate the residual depletion profile of these agents after oral administration in fish, from an experimental study. The sample preparation involved the use of the liquid-solid extraction procedure associated with dispersive liquid-liquid microextraction with innovative modifications, and an LC-MS/MS analytical system. Given the predominantly oral administration of the drugs to the animals, through feed, correct treatment dosage, and environmental safety are fundamental considerations. Thus, drug incorporation methods were developed and validated with adequate selectivity, linearity (r>0.99), repeatability, and intermediate precision (CV<3.38%); accuracy, expressed as recovery factor (>97%<103%), drug incorporation efficiency (59-72%), adequate homogeneity (CV<6%), and low leaching (<5.1%) of the actives when the feed remained in contact with water for up to 15 minutes. The LC-MS/MS was set up with an electrospray interface operating in positive mode, and mobile phase composed of water and methanol containing 0.5% formic acid in isocratic mode. The depletion study was conducted on tilapia fish, involving treatment with medicated feed at the daily oral dose of 50 mg (kg BW&sup-1;) for DOX and 80 mg (kg BW&sup-1;) for OTC, both for 5 consecutive days. The average water temperature was maintained at 30°C, and the minimum estimated withdrawal period was 4 days (or 120 Degree-days) for the elimination of DOX residues and 3 days for OTC (or 90 Degree-days), reaching levels below the concentrations considered safe for these substances, based on established MRLs (100 ng g-1 for DOX and 200 ng g-1 for OTC), with 95% confidence and considering a tolerance limit of 99%.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPPaschoal, Jonas Augusto RizzatoDamaceno, Marina Alves2024-03-13info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-05122024-173401/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2025-03-07T14:55:01Zoai:teses.usp.br:tde-05122024-173401Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212025-03-07T14:55:01Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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