Repolarização de macrófagos associados ao tumor (TAMs) para macrófagos antitumorais M1 em leucemia mieloide aguda: um modelo murino

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Pinheiro, Lucio Henrique Sousa
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Acute myeloid leukemia; Fagocitose; Imunologia tumoral; Leucemia mieloide aguda; Macrófagos associados ao tumor; Phagocytosis; Tumor immunology; Tumor-associated macrophages
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-13032026-123311/

A leucemia mieloide aguda (LMA) é uma neoplasia hematológica agressiva, caracterizada pelo acúmulo de células mieloides imaturas na medula óssea (MO) e sangue periférico (SP). Diversas alterações no microambiente da MO foram associadas à gênese e progressão da LMA, algumas afetam o sistema imunológico e favorecem a evasão tumoral. Também contribuem para estes processos alterações genéticas, tais como a superexpressão do gene MN1 abordada neste estudo. Ela está relacionada a um fenótipo leucêmico mais agressivo e resistência terapêutica. Dentre os achados patológicos no microambiente da MO leucêmica, o aumento relativo dos macrófagos associados ao tumor (do inglês, tumor-associated macrophages TAMs) parece ser favorável à progressão da LMA. Os TAMs têm fenótipo semelhante ao observado em macrófagos M2 saudáveis, e, portanto, associados à atividade antiinflamatória e imunosupressora. Nesse contexto, abordagens terapêuticas capazes de reprogramar os TAMs para um estado mais inflamatório e antitumoral, similar ao fenótipo M1, têm sido investigadas. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos imunomoduladores dos compostos plinabulina, um inibidor da polimerização da tubulina, e selumetinibe, um inibidor das quinases MEK1/2, sobre TAMs em modelos de LMA decorrentes da superexpressão do MN1. Nosso interesse decorreu de descrições na literatura que sugeriram que esses compostos teriam ação na polarização de macrófagos. Foram utilizados modelos in vitro e in vivo com macrófagos humanos e murinos diferenciados a partir de monócitos do SP ou derivados da MO, submetidos à polarização clássica (M1) ou alternativa (M2), além de coculturas com linhagens de LMA. Os efeitos dos fármacos sobre o perfil imunofenotípico, expressão gênica, atividade fagocítica, perfil secretório e capacidade de suprimir o crescimento leucêmico foram avaliados por citometria de fluxo, qRT-PCR e ensaios funcionais in vitro. Também foram analisados os efeitos citotóxicos de ambos os fármacos sobre o crescimento de células de LMA em modelo murino usando o transplante de células superexpressando o gene MN1. Nossos resultados demonstraram que ambos os compostos modularam significativamente a expressão de marcadores, promovendo aumento na expressão de CD86 e redução de CD163 em amostras humanas. Também foi observada uma maior secreção de citocinas pró-inflamatórias, como IL-1 e TNF-, e redução da secreção de TGF-. Em amostras murinas, observamos um aumento na expressão de genes associados ao fenótipo M1 (Cd80, Tnf- e Nos2) e redução de Arg1, um marcador clássico de macrófagos M2. Nos ensaios com co-cultura de macrófagos e células de LMA, os primeiros apresentaram aumento da atividade fagocítica e inibiram a proliferação de células leucêmicas. Além disso, o microambiente leucêmico induzido in vitro condicionou os macrófagos a um perfil tolerogênico, parcialmente revertido pelos tratamentos, evidenciando sua plasticidade funcional. A plinabulina, em particular, apresentou efeitos citotóxicos diretos sobre células CD34 leucêmicas de amostras de pacientes e reduziu a carga tumoral em modelo murino, sugerindo seu potencial terapêutico. O selumetinibe, embora tenha modulado o fenótipo e função dos macrófagos, não apresentou efeito citotóxico significativo in vivo. Esses achados reforçam o potencial da reprogramação de macrófagos como estratégia complementar no tratamento da LMA, especialmente em subtipos de alto risco molecular, como os associados à superexpressão de MN1.