Efeito dos extratos orgânicos, frações e substância isolada da cianobactéria marinha Geitlerinema sp. sobre funções mediadas por receptores Fcγ em neutrófilos humanos

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Pessoa, Allana Ferreira da Costa
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs); Bioprospecção; Bioprospecting; Cianobactérias marinhas; Espécies reativas de oxigênio (ERO); Marine cyanobacteria; Natural products; Neutrófilos; Neutrophil extracellular traps (NETs); Neutrophils; Palmitic acid; Palmitoleic acid; Produtos naturais; Reactive oxygen species (ROS)
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-24092025-115225/

Os neutrófilos são células-chave do sistema imunológico, mas também estão envolvidos na patogênese de doenças inflamatórias crônicas, tornando-os alvos para o desenvolvimento de novos compostos terapêuticos. As cianobactérias marinhas são organismos procarióticos capazes de produzir compostos naturais com estruturas químicas únicas e forte atividade antioxidante e anti-inflamatória. Este estudo teve como objetivo examinar se extratos, frações e compostos isolados de cianobactéria marinha Geitlerinema sp. modulam as funções efetoras de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e liberação de armadilhas extracelulares mediadas por receptores Fcγ (FcγR) de neutrófilos humanos, bem como avaliar o efeito sobre a expressão desses receptores. A biomassa e o meio de cultura de cianobactérias cultivadas por 90 dias foram extraídos por partição líquido-líquido em acetato de etila (AcOET) e metanol (MeOH). Em seguida, a biomassa foi filtrada e o extrato foi fracionado por cromatografia líquida a vácuo usando sílica como fase estacionária e gradientes de polaridade crescente de AcOEt e MeOH como fase móvel. O isolamento e a caracterização da substância foram feitos usando cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa e análises estatísticas multivariadas não supervisionadas e supervisionadas. Neutrófilos foram isolados de amostras de sangue periférico de indivíduos saudáveis e tratados com os extratos e suas respectivas frações. A citotoxicidade dos extratos e frações sobre os neutrófilos foi determinada pelos ensaios de exclusão do azul de Trypan, liberação de lactato desidrogenase e redução do sal de tetrazólio. A produção de ERO foi analisada usando o ensaio de quimioluminescência dependente de luminol, a quantificação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NET) foi analisada usando o teste de Picogreen, imunocoloração e microscopia confocal. A expressão de FcγR foi analisada por imunofenotipagem e citometria de fluxo. Os extratos MeOH e suas frações A, B e C mostraram uma porcentagem menor citotoxicidade e suprimiram a produção de ERO de maneira dependente da concentração. A fração C mostrou os melhores resultados e rendimento de biomassa para isolamento. Então, o rendimento da fração C permitiu avançar para o isolamento de substâncias, tendo sido isolada a substância B3, a qual foi identificada como ácido palmítico ou ácido palmitoleico. A seguir, o efeito da substância B3 sobre os neutrófilos -citotoxicidade, produção de ERO, NET e expressão de Fcγ - foi analisado em comparação com ácido palmítico e ácido palmitoleico adquiridos comercialmente. Essas três substâncias reduziram a produção de ERO e liberação de NET. Em conclusão, esses resultados sugerem fortemente uma correspondência de identidade da substância B3 com o ácido palmítico ou ácido palmitoleico, revelando seu potencial farmacológico para o tratamento de desordens inflamatórias, onde a patogênese é mediada por produção excessiva de ERO e liberação de NET pelos neutrófilos.