Solução irrigadora à base de probiótico: Avaliação microscópica, genética e molecular do efeito na expressão de armadilhas extracelulares de neutrófilos, em dentes de ratos com lesões periapicais induzidas

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Moura, Ana Paula Gomes e
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Armadilhas extracelulares de neutrófilos; Catelicidinas; Cathelicidins; HN019; Lesão periapical; LL-37; Neutrophil extracellular traps; Periapical lesion; Probiotic; Probiótico
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/58/58135/tde-23012025-082708/

As Armadilhas Extracelulares de Neutrófilos (NETs) são uma das formas de atuação dos neutrófilos na resposta imune inflamatória do hospedeiro, mas em caso de formação exacerbada podem levar à dano tecidual. Paralelamente, estudos anteriores demonstraram o efeito positivo de probióticos em infecções pulpares. Contudo, o efeito de probióticos sobre as NETs ainda é desconhecido. Assim, o objetivo geral deste estudo foi avaliar o efeito da administração local do probiótico Bifidobacterium animalis subsp. lactis (B. lactis) HN019, como solução irrigadora, na expressão das NETs e do peptídeo antimicrobiano CRAMP, em lesões periapicais induzidas experimentalmente em ratos. Após a indução das lesões periapicais experimentalmente, os animais foram divididos em três grupos e quatro subgrupos de acordo com a solução irrigadora e o número de sessão/irrigação, conforme segue: Grupo I (9 animais): sem tratamento; Grupo II: Hipoclorito de Sódio a 2,5% (18 animais) - IIa: uma irrigação (9 animais) e; IIb: duas irrigações (9 animais); e Grupo III: Probiótico (18 animais) - IIIa: uma irrigação (9 animais) e; IIIb: duas irrigações (9 animais). O probiótico B. lactis HN019 foi utilizado como solução irrigadora (2,7x109 UFC em meio aquoso em 2% de carboximetilcelulose) com volume de 600&micro;L, em aspiração concomitante, além da adição de 5&mico;L que foram mantidos no canal radicular. Após 21 dias da indução das lesões periapicais, os animais foram eutanasiados e as hemi-maxilas e hemi-mandíbulas direitas foram processadas para análises microscópicas, genéticas e moleculares. As lâminas foram coradas com hematoxilina e eosina (HE) e analisadas em microscopia óptica para avaliação descritiva e semi-quantitativa dos parâmetros do ligamento periodontal, infiltrado inflamatório, reabsorção cementária e reabsorção óssea, além de contagem de neutrófilos e histomorfometria da área das lesões periapicais. Adicionalmente, foi realizada imunohistoquímica para a marcação de CRAMP (ortólogo do LL-37 humano) e imunofluorescência indireta para detecção das NETs por meio dos marcadores de elastase de neutrófilos (NE), histona H3 citrulinada (H3Cit) e mieloperoxidase (MPO). As hemi-maxilas direitas foram processadas para a realização da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR) para avaliação da expressão do mRNA dos genes ELANE, H3F3B, MPO e CAMP. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística por meio dos testes de Shapiro-Wilk ou KruskalWallis (H), considerando a abordagem post hoc de Dwass-Steel-Chritchlow-Fligner, com nível de significância de 5%. A comparação dos escores da análise semi-quantitativa indicou que em relação ao ligamento periodontal e ao infiltrado inflamatótio houve diferença significativa entre os grupos (p=0,03 e p=0,004, respectivamente). Em relação ao tecido ósseo, houve 100% de presença de reabsorção no grupo sem irrigação (Grupo I) e nos grupos nos quais o hipoclorito de sódio a 2,5% foi utilizado como solução irrigadora (Grupo IIa e IIb), enquanto os grupos irrigados com probiótico tiveram 28,57% e 75% de presença, nos grupos GIIIa e GIIIb, respectivamente. Observou-se reabsorção cementária no grupo sem irrigação (Grupo I) e uma irrigação com hipoclorito de sódio a 2,5% (GIIa) em 100% dos casos, enquanto a presença da reabsorção cementária no grupo duas irrigações com hipoclorito de sódio a 2,5% (GIIb) foi de 71,43% e nos grupos do probiótico foi de apenas 14,29%, no que recebeu uma irrigação (GIIIa), e 50% no que recebeu duas irrigações (GIIIb). A contagem do número de neutrófilos não apresentou diferença significativa entre os grupos (p=0,064). Em relação à comparação da área da lesão periapical formada (mm2), houve diferença significativa entre os grupos (p=0,002), indicando que o grupo que recebeu uma irrigação com solução à base de probiótico produziu lesões periapicais com área significativamente menor em relação à ausência de irrigação. Sobre a porcentagem de área marcada para CRAMP, foi observada diferença significativa entre os grupos (p=0,001), demonstrando que uma irrigação com solução à base de probiótico e duas irrigações com hipoclorito de sódio a 2,5% estiveram associadas a uma maior área imunomarcada, em relação à ausência de irrigação. Ainda, com relação à porcentagem de NETs por área, observou-se diferença estatística significante na avaliação da H3Cit (p=0,002), MPO (p<0,001) e NE (p=0,001). Em relação à expressão gênica do CAMP, também foi observada diferença significante entre os grupos (p<0,001), além do MPO e ELANE (p=0,002 e p=0,001, respectivamente). Entretanto, não houve diferença significativa entre os grupos na expressão do H3F3B (p=0,307). Com base nos resultados deste estudo, conclui-se que a solução irrigadora à base de probiótico foi capaz de reduzir a formação das armadilhas extracelulares de neutrófilos. Além disso, a solução de probiótico estimulou a expressão do CRAMP e apresentou efeito positivo contra a reabsorção cementária e óssea.