Caracterização bioquímica e funcional da serina acetil-transferase e da cisteína sintase de Trypanosoma cruzi.

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Giraldo, Ana Milena Murillo
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Trypanosoma cruzi; Cisteína; Cisteína Sintase; Cysteine; CysteineSynthase; Serina Acetyl-Transferase; SerineAcetyl-Transferase
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-19112025-174328/

A doença de Chagas é causada pelo protozoário parasita Trypanosoma cruzi, que afeta cerca de 6 milhões de pessoas, principalmente nas Américas. O T. cruzi utiliza aminoácidos como importantes fontes de energia, assim como em vários processos biológicos como diferenciação, resistência a condições de estresse e invasão de células hospedeiras. Nesse contexto, a cisteína (Cys) está envolvida em variadas vias biosintéticas, e uma das suas funções relevantes é a de contribuir com o metabolismo redox tanto por sí própria como através do seu uso como precursos para a biosíntese de outros metabólitos contendo grupos tióis. Nesse sentido, o estudo das vias envolvidas no síntese da Cys é relevante. Até o momento, existem duas vias descritas: i) a via da transulfuração da metionina (Met) e, ii) a via da síntese de novo a partir de serina (Ser). Nesta última, a Ser pode inicialmente ser acetilada pela Ser-O-acetiltransferase (SAT) formando o intermediário O-acetilserina (OAS). Em um segundo passo o grupo acetil é substituído pelo grupo -SH, reação catalisada pela Cys sintase (CS). Neste trabalho, identificamos os genes que codificam para as duas enzimas acima mencionadas envolvidas na biossíntese de novo da Cys, e caracterisamos as suas atividades. Utilizando a técnica CRISPR/Cas9, obtivemos knockouts nos quais um alelo da TcSAT e um alelo da TcCS foi substituído pelo gene da higromicina e a blasticidina, respectivamente. Os parasitas mutantes apresentaram diferenças na proliferação das formas epimastigotas, na resistência ao estresse nutricional e oxidativo. A capacidade de diferenciar de formas epimastigotas para formas tripomastigotas metaciclicos não foi afetada, mas os parasitas knockouts para TcCS mostraram um aumento significativo tanto no índice de infecção como no número de tripomastigotas liberados de células CHO-K1 infectadas com formas metacíclicas knockouts.