Análise proteômica do esmalte de dentes decíduos para a estimativa do sexo em crianças

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Oliveira, Larissa Dutra Bittencourt de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Amino acids peptides and proteins; Aminoácidos peptídeos e proteínas; Antropologia forense; Espectrometria de massas; Forensic anthropology; Human identification; Identificação humana; Mass spectrometry; Proteômica; Proteomics
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17143/tde-20052020-092445/

Os métodos de estimativa de sexo em contextos forenses são realizados em esqueletos adultos por meio de análises métricas, morfológicas ou por DNA especificamente pelo gene da amelogenina relacionado ao cromossomo sexual. Porém, a aplicação de metodologias semelhantes em amostras forenses de esqueletos subadultos enfrentam limitações que levam ao insucesso da estimativa correta do sexo. A proteína amelogenina é expressa no elemento dental, que devido à sua dureza, durabilidade e resistência a insultos post mortem, sobrevive a uma variedade de efeitos destrutivos causados por alterações mecânicas, químicas, físicas e térmicas, se tornando um repositório de informações. As amelogeninas, por splicing alternativo, derivam isoformas que diferenciam suas origens dos cromossomos X ou Y. Por atuação de enzimas MMP-20 e KLK4 durante a amelogênese, peptídeos são gerados permanecendo no interior dos prismas do esmalte. Sendo assim, o presente trabalho objetivou extrair, identificar e analisar qualitativamente e quantitativamente, por cromatografia líquida e espectrometria de massas, esses peptídeos derivados das isoformas Y e X do gene da amelogenina, AMELY e AMELX respectivamente, presentes no esmalte de dentes decíduos de crianças entre 6 e 8 anos de idade para estimar o sexo no processo de identificação humana em esqueletos subadultos. Foram extraídos peptídeos da AMELY e AMELX do esmalte dental de 40 dentes decíduos pela técnica de ataque ácido com HCl a 10% na coroa dental utilizando uma ponteira Zip Tipâ C18 e posterior injeção para análise no sistema EASY-nLC IIÔ acoplado a um espectrômetro de massas LTQ Orbitrap Velos para sequenciar e diferenciar os peptídeos AMELY e AMELX para a estimativa do sexo biológico das crianças. Os raw data gerados pelo espectrômetro de massas foram confrontados no software Proteome Discoverer 2.3 juntamente com o SEQUEST contra o banco de dados UniProt. Foram selecionados para estudos os 4 peptídeos da AMELY e 9 peptídeos da AMELX mais prevalentes identificados nas amostras. Os resultados mostraram que foi possível diferenciar e identificar peptídeos AMELY e AMELX utilizando o software Tracefinder(TM), e analisar qualitativamente as amostras. Os resultados mostraram que 15 amostras do grupo feminino e 19 amostras do grupo masculino tiveram concordância entre os sexos real e estimado das crianças. Quantitativamente foi demonstrado a prevalência de expressão e equilíbrio de distribuição da AMELX nas amostras do grupo masculino em relação ao grupo feminino. E pode-se concluir que a análise por nLC-MS/MS dos peptídeos dimórficos da amelogenina presentes em dentes decíduos pode ser utilizada de forma segura para a estimativa do sexo biológico em esqueletos de crianças entre 6 e 8 anos de idade na prática forense, sobressaindo de forma confiável e vantajosa às metodologias aplicadas nos dias atuais por análises métricas e morfológicas.